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目的:(1)观察正常人及类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells PBMCs)蛋白质的双向凝胶电泳图谱,并分析其差异表达的蛋白质,寻找RA疾病相关蛋白,探讨RA的发病机制;(2)观察痹肿消汤(Bizhongxiao decoction,BZXD)干预前后RA患者PBMCs的差异蛋白质表达,探讨BZXD治疗RA的作用机理。方法:(1)选取18例早期活动期RA患者,随机分为两组,一组为治疗组(n=9,简称BZXD组),口服痹肿消汤。另一组为对照组(n=9,简称MTX组),予口服甲氨蝶呤(Methotrexate MTX)和普威。9名健康正常成年人为正常对照组。(2)观察并比较两组患者治疗前后的晨僵(morning stiffness)时间、握力、关节压痛数(Tender joint count,TJC)、关节压痛指数(Tenderjoint count index,TJI)、关节肿胀数(Swollen joint count,SJC)、关节肿胀指数(Swollen joint count index,SJI)以及治疗前后的血沉(erthrocyte sedimentation rate,ESR),C反应蛋白(C-reactiveprotein,CRP),类风湿因子(rheuatoid factor,RF)的变化。(3)用淋巴细胞分离液分离PBMCs,抽提PBMCs中的蛋白,采用固相pH梯度(immobilized pH gradient,IPG)双向凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)分离正常人及RA患者PBMCs总蛋白质。凝胶经考染显色后,PDQuest图像分析软件进行比较分析、识别差异表达的蛋白质,对差异蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)进行鉴定,然后搜索数据库鉴定部分差异蛋白质点,运用逆转录聚合酶链式反应(reversetranscription polymerase chain reaction,RT-PCR)方法验证差异表达蛋白。结果:(1)临床疗效观察:治疗三个月后,两组患者的晨僵、关节压痛数、关节压痛指数、关节肿胀数、关节肿胀指数、握力等主要症状与体征均较前均有显著改善(p<0.01或p<0.05);但BZXD组在改善关节压痛数、关节压痛指数方面优于MTX组(p<0.05)。经治疗后,两组的ESR,CRP等炎性指标较前有明显降低(p<0.01或p<0.05);BZXD组的ESR、CRP下降较MTX组更明显(p<0.05)。BZXD组临床显效率为77.8%,总有效率为88.9%;MTX组临床显效率为55.6%,总有效率为77.8%;BZXD组总有效率优于MTX组(p<0.05)。(2)各组PBMCs总蛋白2-DE图谱的建立及差异蛋白质识别:分别获得正常人、RA患者治疗前、后PBMCs总蛋白2-DE图谱,通过比较分析,差异表达蛋白质点数为23,选取18个点进行质谱鉴定,成功鉴定15个蛋白质,与正常人比较其中8个蛋白质点在RA中表达上调,7个表达下调。与MTX组比较,BZXD组有6个蛋白质表达差异更为明显。(3)差异蛋白质点质谱鉴定及蛋白功能分类:发现并鉴定了正常人、RA患者治疗前、治疗后PBMCs中的差异表达大于2倍的蛋白质点15个。根据NCBI、MSDB数据库中提供的的信息,这些差异蛋白质的功能涉及物质代谢、能量产生、物质转运、抗氧化应激、信号转导及细胞骨架等。其中apolipoprotein A-I、actin,beta、Talin 1、ATP synthase、phosphatidylethanolamine-binding protein、Prohibitin、Ras related protein、Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K.等蛋白可能与RA病变密切相关。(4)差异蛋白验证结果:RT-PCR方法证实ApoA-I在正常组、RA治疗组、对照组的表达水平与2-DE结果一致。结论:(1)找到了正常人与RA患者PBMCs间存在一些差异表达的蛋白质,它们在RA发病机理中发挥潜在作用;BZXD可调节RA的PBMCs中多种蛋白质的表达。(2)ApoA-I的RT-PCR验证结果与2-DE结果一致。BZXD可能通过调节RA患者PBMCs中ApoA-I表达水平来发挥治疗作用。(3)BZXD改善RA病人的症状与体征,控制急性炎性反应优于MTX组,且无明显的副反应。