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本研究以18个金花梨变异单系为试材,并以金花梨(Pyrus Brestchneideri Rehdcv Jinhua)为对照,对其物候期、叶片和果实病情指数、光合效能、果实经济性状等进行了观测和分析;并用18个变异单系和2个金花梨的叶片提取DNA,进行AFLP分子标记分析。结果表明: 1、金花梨在大面积推广栽培过程中,极易发生遗传变异,18个变异单系都在金花梨的基础上发生了遗传变异,AFLP的聚类结果为:二大类群(遗传相似系数为0.67时)和十大类单系(遗传相似系数为0.91时):J1、J2、J6、J3、J4、J5、J7、J9、J10、J8为第一大类群;J11、CK1、CK2、J14、J14、J15、J16、J17、J18、J12为第二大类群。十大类单系分别为:J1、J2为第一类单系;J6为第二类单系;J3、J4、J5、J7为第三类单系;J9、J10为第四类单系;J8为第五类单系;J11为第六类单系;CK1、CK2为第七类单系:J13、J14、J15为第八类单系;J16、J17、J18为第九类单系;J12为第十类单系。 2、金花梨18个变异单系叶片梨黑星病病情指数分析表明,各单系抗病能力强弱为:J4最强,其次分别为:J17、J15、J7、J6、J3、J8,且抗黑星病能力由品种(系)遗传特性决定,高湿度和温度为20-24.5℃是发病的最佳条件。 3、金花梨变异单系叶片梨锈病病情指数分析表明:各单系抗锈病的强弱依次是:J16、J3、J15、J18、J13、J1、J7最强:其次是J5、J10、J4、J2、J17、J6、CK;抗锈病能力强弱由品种(系)遗传特性决定,且与环境中的寄主、湿度、风力、风向关系密切。 4、金花梨18个变异单系果实病情指数分析表明:抗病能力最强的是J16、J13、J8、J3、J5,其次是J7、J14。 5、叶片光合效能分析表明:金花梨变异单系的光合效能均高于南果梨和苍溪雪梨,各单系的光合效能差异主要是由光照条件是否良好决定。 6、金花梨高质量、高纯度基因组DNA提取方法研究表明,改良CTAB法是提取梨DNA的最佳方法,18新鲜材料提取液以5ml最适宜,65℃浸提的临界时间是30′,65℃恒温1小时是获得AFLP所需高质量、高纯度DNA的最佳条件,且DNA产率大。 7、金花梨变异单系AFLP分析结果表明: 门)双酶切必须完全彻底才能出现稳定的扩增带型;模板DNA片断大,无 降解,无 RNA,OD(260)/OD(280)均在 1.7-l.9之间才能符合 AFLP分子标记 要求。 (2)引物的正矾设计和筛选是获得扩增位点多、多肽性强、带型质量好和分 辨率高的前提条件。 u)EcoRI/Msel是金花梨变异单系DNA十分重要的内切酶。选择性碱基以 EcoRI-ACC/Msel CAC优于 EcoRI AGCMsel CAC,也优于 EcoRI ACCMsel CAT。 含AC较多的选择性碱基适合金花梨变异单系扩增。 N)金花梨变异单系 AFLP分析表明:1对引物平均扩增 17.7个位点,其中 多肽性位点平均门.3个,所占比例高达 66.9%,具有较高的遗传多样性。 6)AFLP指纹图谱的特异带(或差异带)可以作为亲缘关系远近,性状变 异的标记,从而为育种、登录新品种、目的基因的转入鉴定提供依掘,也为检测 果树品种苗木的真实性和纯度,仲裁苗木纠纷,规范果树苗木市场提供客观、科 学和准确的技术鉴定依据。 “)AFLP指纹图谱的分析结果与变异单系的性状表现(抗病性、果实经济 性状、光合效能)相一致。 ()引物不同,使同一材料的 AFLP指纹图谱不一致,但结论是一致的,可 以充分说明AFLP的精确性高和重复性强的特点。 8.调查研究和 AFLP分于标记分析均表明:各单系发生了遗传变异。