iTRAQ技术鉴定百草枯诱导大鼠肺纤维化模型中差异表达蛋白的研究

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背景肺纤维化(pulmonary fibrosis,PF)是目前在呼吸系统中死亡率非常高的一种疾病,诱导其发病的因素也很多,PF的主要临床特征有呼吸困难逐渐递增和肺间质纤维增生呈弥漫性。能够引起PF的发病因素有很多,由于缺乏有效的药物来治疗,所以其预后的效果并不十分理想。百草枯(paraquat,PQ)是目前应用比较广泛的一种除草剂,百草枯中毒之后最主要靶点之一就是肺部,人体接触之后极易在肺部聚积,之后引起的肺水肿、低氧以及肺部急性损伤都可能导致肺纤维化的发生,但其作用机制目前还不十分清楚。本研究以百草枯诱导的大鼠肺纤维化模型为研究对象,分析鉴定大鼠肺纤维化肺组织之间的差异表达蛋白,以期寻找与肺纤维化相关的关键蛋白,为探索阐明肺纤维化形成、发生发展机制奠定重要的理论和实验基础。目的用同位素标记相对与绝对定量(iTRAQ)技术筛选百草枯诱导的大鼠肺纤维化模型特异性表达蛋白,以期找到一些与肺纤维化相关的蛋白。方法将20只雄性SD大鼠(180-200g)分为两组:模型组:灌胃给予50mg/kg百草枯,对照组:灌胃给予50mg/kg生理盐水。在第28天时分别处死两组大鼠,通过HE染色的方法观察大鼠肺组织学的改变;应用iTRAQ标记联合LC-MS/MS质谱检测分析蛋白的表达量;利用NCBI数据库和Proteome Discoverer软件分析蛋白表达间的差异。结果HE染色表明实验组大鼠肺纤维化分级大于对照组;iTRAQ技术分析鉴定出268个差异表达蛋白,其中表达上调蛋白194个,表达下调蛋白74个。结论通过筛选百草枯诱导的大鼠肺纤维化模型特异性表达蛋白,表明iTRAQ标记联合LC-MS/MS质谱技术可以对表达具有差异的蛋白进行相关研究,并通过筛选的方法获得与肺纤维化的发生和发展有关联的蛋白质,这将对了解肺纤维化的发生发展过程产生十分重大的意义,并且还可能为肺纤维化的治疗或者预后提供理论基础。
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