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鸭传染性浆膜炎是由鸭疫里默氏杆菌(RA)引起的危害养鸭业最为严重的传染病之一。由于RA菌株的血清型较多,耐药率高且广泛、交叉耐药性多,疫苗、药物防治效果尚不理想,因此寻找安全可靠、无有害残留、不易产生耐药性的药物迫在眉急。本试验拟从抗菌和免疫功能方面研究中药对鸭传染性浆膜炎的作用情况,为临床防治提供参考。根据本病的中兽医治疗原则,选择出具有清热解毒、杀菌消炎及补气健脾药类的22味中药,用牛津杯法对RA菌株进行体外抑菌试验,然后依据组方配伍原则,筛选出6个抑菌效果较好的组方Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ,Ⅴ和P,通过攻毒保护及淋巴细胞转化试验(MTT法)确定最佳组方P,在此基础上研究组方P对鸭免疫器官指数、血清生化指标和细胞因子表达的影响。研究结果如下:
(1)体外抑菌试验
选择17种抗生素药敏纸片对RA菌株进行敏感试验,结果显示:该菌仅对头孢塞肟、卡那霉素、头孢塞吩和阿莫西林高度敏感;对氨苄西林、依诺沙星、头孢唑啉、环丙沙星和强力霉素中度敏感;对青霉素,四环素,红霉素和诺氟沙星低度敏感;而对复方新诺明、四环素、吡哌酸耐药或完全耐药。中药药敏试验结果显示:单味中药黄连、黄芩、丹参等对RA均有抑制作用,其中抑菌作用最强的是黄连、诃子、黄芩、丹参和陈皮;6个组方对RA均有一定抑制效果,其中组方Ⅰ、Ⅱ和P抑菌作用最强。
(2)中药组方对鸭传染性浆膜炎的攻毒保护试验
组方P以两种方式进行攻毒保护,即P1为提前灌药3d后攻毒,P2为攻毒后灌药;组方Ⅱ和P2相同。结果表明,组方P和组方Ⅱ均对鸭传染性浆膜炎有一定的防治效果,以组方P最好:P1组(预防组)鸭只死亡率为23%、治愈率为77%,保护率为60%;P2组(治疗组)鸭只死亡率为46%、治愈率为54%,保护率为20%。
(3)鸭外周血淋巴细胞(PBMC)转化试验
组方Ⅰ、Ⅱ与P分别设8个浓度梯度,用MTT法进行体外鸭PBMC转化试验,结果显示:鸭PBMC转化的最佳细胞浓度为5×106 cells/mL;中药组方最佳刺激浓度为1.25mg/mL,SI值:组方Ⅱ>组方Ⅰ>组方P,均强于ConA组。说明三个组方均促进鸭PBMC的转化,增强或提高机体细胞免疫的水平。
(4)组方P对鸭免疫器官及血清生化指标的影响
结果显示:P1组鸭脾脏指数和胸腺指数显著或极显著高于y组(阳性对照组)与K组(健康对照组)(p<0.05;p<0.01),P2组的极显著高于K组(p<0.01);与y组相比,它们均极显著降低血清总胆固醇(p<0.01),其中P1组可导致血清中总蛋白的下降。
(5)组方P对鸭PBMC IFN—γ和IL—6 mRNA表达的影响
应用实时荧光定量RT-PCR方法检测21日龄雏鸭PBMC IFN—γ和IL—6mRNA的表达水平,结果显示:P1组极显著提高鸭PBMC IFN—γ mRNA的表达量(p<0.01);P2组显著提高IFN—γ mRNA的表达量(p<0.05);P1、P2组IL—6mRNA的表达量有升高的趋势(p<0.1)。说明组方P能促进机体分泌IFN—γ及IL—6,提高机体抗病力和免疫调节能力。
综上所述,中药组方P煎剂对鸭传染性浆膜炎有较好的防治效果,该组方能促进免疫器官的发育、细胞因子的分泌及提高细胞免疫水平,提高机体抗病力和免疫调节能力。