双孢菇（Agaricus bisporus（Large）Sing.）为伞菌科蘑菇属真菌,具有助肠胃、降血压、化痰理气等功效,多糖是其重要活性成分。本文采用顺序提取和分离纯化的方法制备双孢菇多糖,对其分子结构、抗氧化活性、免疫调节活性和抗结肠癌活性进行研究。研究结果主要如下:采用常温水、热水、高压热水、0.1 mol/L Na OH溶液、1 mol/L Na OH溶液对双孢菇多糖进行顺序提取,获得WAP、HWAP、HPWAP、WAAP和SAAP五种粗多糖。五种组分的总糖含量分别为51.15%、57.95%、57.11%、68.46%、78.18%,蛋白质含量分别为16.39%、12.60%、8.32%、4.69%、0.85%。单糖组成结果表明,粗多糖均由甘露糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖组成,其中葡萄糖含量最多,分别为50.80%、70.76%、79.05%、84.37%、93.84%。碱提取的WAAP、SAAP呈卷曲、多孔结构,表面积增大,且在热特性分析中表现出更好的热稳定性。采用DEAE Cellulose-52柱层析法从WAAP中分离纯化得到WAAP-1、WAAP-2、WAAP-3三个均一组分,分子量分别为10.1 k Da、121 k Da、103 k Da。WAAP-1、WAAP-2、WAAP-3均由甘露糖、葡萄糖、半乳糖和木糖组成,摩尔比分别为8.97:84.95:4.50:1.58、8.81:81.80:6.89:2.49、7.03:84.66:6.31:2.01。一级结构分析表明,WAAP-1主链由→6)-β-D-Manp-（1→、→4）-α-D-Glcp-（1→、→6）-α-D-Glcp-（1→和→4,6）-β-D-Glcp-(1→组成,α-D-Galp-（1→组成的支链结构与主链→4,6）-β-D-Glcp-（1→的O-4位相连。WAAP-2主链由→6）-β-D-Manp-（1→、→4）-β-D-Glcp-（1→、→6）-β-D-Glcp-（1→、→4,6）-β-D-Glcp-（1→和→3,6）-β-D-Glcp-(1→组成,由α-D-Galp-（1→、→3）-β-D-Glcp-（1→组成的支链通过→4,6）-β-D-Glcp-（1→的O-4位和→3,6）-β-D-Glcp-（1→的O-3位与主链相连。WAAP-3主链由→6）-β-D-Manp-（1→、→4）-β-D-Glcp-（1→、→6）-β-D-Glcp-（1→和→3,6）-β-D-Glcp-(1→组成,α-D-Galp-（1→和→3）-β-D-Glcp-（1→组成的支链结构连接在→3,6）-β-D-Glcp-(1→的O-3位。高级结构分析表明,WAAP-1、WAAP-2、WAAP-3都以无定形结构存在,属于半结晶聚合物,其中WAAP-2和WAAP-3具有三螺旋和纠缠链状构象。抗氧化实验表明,WAP、HWAP、HPWAP、WAAP、SAAP在实验浓度范围内表现出良好的自由基清除和铁还原能力。与WAAP-1、WAAP-2相比,WAAP-3能够有效活化巨噬细胞,增强吞噬活性,促进NO分泌。对比分析体外抗结肠癌活性,WAAP-1、WAAP-2、WAAP-3以时间和浓度依赖的方式抑制HT-29细胞增殖,促进染色质凝聚、细胞核碎裂,凋亡小体产生,导致细胞周期停滞在S期发挥诱导凋亡的作用。Western-blot结果表明,WAAP-1、WAAP-2、WAAP-3通过上调Caspase-3、Bax、E-cadherin蛋白的表达,下调Bcl-2、Vimentin蛋白的表达来促进HT-29凋亡和抑制上皮间充质转化。综合分析双孢菇多糖的结构-功效关系,与WAAP-1相比,具有β-1,6葡聚糖结构和三螺旋构象的WAAP-2、WAAP-3的生物活性较好。