【摘 要】
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研究目的明确TGF-β1能否诱导胃癌细胞株EMT的发生;在EMT过程中,研究TGF-β1与miR-200c之间存在何种联系;最后观察miR-200c的表达与TGF-β1诱导的EMT的相关性。研究方法1.相同浓度TGF-β1诱导胃癌细胞株SGC-7901不同时间,Western-blot法检测EMT相关标志蛋白表达情况,CCK-8法检测细胞增殖能力;2.建立SGC-7901细胞EMT模型后,定量PC
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研究目的明确TGF-β1能否诱导胃癌细胞株EMT的发生;在EMT过程中,研究TGF-β1与miR-200c之间存在何种联系;最后观察miR-200c的表达与TGF-β1诱导的EMT的相关性。研究方法1.相同浓度TGF-β1诱导胃癌细胞株SGC-7901不同时间,Western-blot法检测EMT相关标志蛋白表达情况,CCK-8法检测细胞增殖能力;2.建立SGC-7901细胞EMT模型后,定量PCR技术检测TGF-β1对miR-200c表达量的影响;3.通过脂质体瞬时转染方式人为过表达miR-200c,并用TGF-β1进行诱导,显微镜观察胃癌细胞形态,Western-blot法检测EMT相关标志蛋白表达情况变化研究结果1.相同浓度TGF-β1(10ng/ml)诱导胃癌细胞0 h、12 h、24 h、36 h,Western-blot法结果显示:上皮标志蛋白E-cadherin表达随时间增加下降,间充质标志蛋白Vimentin表达随时间增加而增加,CCK-8法结果显示:TGF-β1处理组在0 h、12 h、24 h、36 h细胞增殖能力相比对照组也升高;胃癌EMT体外细胞模型建立成功。2.建立EMT模型后,定量PCR结果提示:相比于阴性对照组,TGF-β1处理组miR-200c表达量更低。3.上调胃癌细胞miR-200c表达,经TGF-β1诱导刺激,倒置显微镜下观察细胞形态提示:与单独TGF-β1处理组相比,TGF-β1+miR-200c组细胞形态出现逆转,趋向于普通SGC-7901细胞株;Western-blot法检测EMT相关蛋白提示:将TGF-β1处理组和TGF-β1+miR-200c组进行比较,TGF-β1+miR-200c组E-cadherin的表达明显逆转,相对上升,Vimentin的表达也明显逆转,相对下降。研究结论TGF-β1可以诱导胃癌细胞EMT的发生,上皮细胞向增殖能力更强的间质细胞表型转变;胃癌细胞EMT中,TGF-β1可以下调miR-200c的表达;miR-200c的高表达可抑制TGF-β1诱导的EMT过程。
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