产低温淀粉酶菌株的筛选及其酶学性质的研究

来源 :新疆农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wanghuia23
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本文依据新疆特殊的地理环境,采集低温土样,定向筛选产低温淀粉酶的微生物以解决酶来源的问题。从来自新疆准噶尔盆地北缘的富蕴和青河县的低温土样中定向筛选得到一株产低温淀粉酶的野生菌株(LA77),根据菌生理生化鉴定为中间气单胞菌(Aeromonas media)。LA77发酵产生的低温淀粉酶最适作用温度为30℃,最佳pH为6.0,其热稳定性较差,在30℃与40℃保温30min后能保持70%和18%左右的酶活力;金属离子Ca2+、K+对酶有不同程度的激活作用,而Cu2+、Hg2+等则对酶有明显的抑制作用。对该菌株产低温淀粉酶实验室发酵条件进行研究得出最佳发酵条件为:碳源1%,氮源2%, 500ml三角瓶装液100ml,20℃,200r/min摇床培养48小时,酶活最高可达23.83u/ml。LA77发酵过程产生的低温淀粉酶为胞外分泌型,发酵液经过盐析纯化后经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检验纯度,凝胶染色后只有一条带,依据已知分子量的标准蛋白结果计算,其分子量约为52.71KD,动力学常数Km值为1.27mg/ml,Vmax为1794umol/(min.ml),该酶对可溶性淀粉的Km值相对较小说明此酶与底物有较好的亲和力。这些性质与国内外有关报道低温淀粉酶性质十分类似,说明此酶具有一定开发应用潜力。
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