用离子交换法从重组大肠杆菌发酵液中分离5-氨基乙酰丙酸

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5-氨基乙酰丙酸(5-aminolevulinic acid,ALA)是所有四氢吡咯化合物的共同前体,广泛存在于细菌、真菌及动植物的细胞中,在农业和医学上应用前景广阔。利用基因重组技术实现ALA的批量生产是合成ALA的新技术。目前对于从发酵液中分离ALA的研究鲜有报道。因此本文主要探讨了用离子交换法分离ALA的工艺。ALA属于氨基酮酸类化合物,分离过程中需要考虑到ALA在发酵液中的稳定性。在低温酸性状态下,ALA溶液较稳定。色素的存在,给ALA的分离纯化和树脂的再生带来诸多不便。本文对重组大肠杆菌发酵液的脱色工艺进行了考察。结果表明,活性炭粉末HC-772脱色效果最好,并进一步优化了脱色条件:活性炭用量2%-3%,发酵液pH5.0,接触时间15-20min。该工艺脱色率达到95.2%,回收率91.6%。5-氨基乙酰丙酸可采用离子交换法进行初步的分离纯化。筛选到强酸性阳离子交换树脂001×7对ALA具有较大的静态交换容量,并且吸附过程动力学性能良好。通过分析ALA在001×7上的穿透曲线和吸附等温线,确定发酵液的吸附pH为5.0。初步采用高效液相色谱法在210nm下测定洗脱液中ALA的纯度。对离子交换过程进行优化,确定最佳操作条件为:吸附流速2BV·h-1,洗脱流速1.5BV·h-1,洗脱剂盐酸浓度1.5M。该条件下,洗脱富集液最高浓度达到30.97g·L-1,HPLC纯度51.78%,回收率85.52%。并采用Φ34×520mm的离子交换柱对优化后的工艺进行放大,完成了ALA的初步分离。进一步探索了ALA粗品的精制纯化工艺。经过乙醇洗杂,提高了ALA粗品的纯度。最终确定采用甲醇溶解,乙醚沉淀ALA粗品的方法进行精制,ALA粗品的HPLC纯度由36.86%增至90.16%。
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