论文部分内容阅读
目的:了解喉癌干细胞与喉癌化疗耐受之间的关系,并利用转录组测序技术筛选出干细胞与普通喉癌细胞之间的差异基因,从中找到多药耐药相关基因,初步分析喉癌干细胞多药耐药的机制。方法:1.用流式细胞仪检测Hep-2、TU177细胞中CD133、CD44的表达率,并使用RTCA法检测Hep-2、TU177细胞在顺铂、5-fu、紫杉醇三种化疗药物作用下的生长曲线,计算不同时间的IC50值,比较两种细胞系中CD133、CD44的表达率与化疗耐受之间的关系。2.用免疫磁珠分选法从Hep-2、TU177细胞中分选CD133+CD44+细胞,使用qPCR法检测CD133+CD44+细胞与亲本细胞中MDR1、MRP2基因的表达,验证干细胞与化疗耐受的关系。3.将分选出的CD133+CD44+、CD133-CD44-及正常的Hep-2、TU177细胞进行转录组测序,检测干细胞与普通喉癌细胞之间的差异基因,进行耐药相关基因筛选,初步分析干细胞耐药机制。结果:1.Hep-2细胞中CD133、CD44阳性率大于TU177细胞。并且,Hep-2细胞在三种药物作用下不同时间的IC50值均高于TU177细胞,说明同为喉癌细胞,Hep-2细胞相对于TU177细胞耐药性更强,同时与CD133、CD44阳性表达率呈正相关。2.Hep-2、TU177经免疫磁珠分选后CD133+CD44+细胞比例可高达80%-90%,这表明MACS富集CD133+CD44+细胞有效。Hep-2分选后MDR1较亲本细胞升高2.68倍,MRP2较亲本细胞升高1.68倍;TU177分选后MDR1较亲本细胞升高6.72倍,MRP2较亲本细胞升高42.69倍,可以看出干细胞富集后,多药耐药相关基因表达增加,说明干细胞的表达与喉癌化疗耐受呈正相关。3.通过转录组测序找出两个喉癌细胞系共有的差异基因12个,通过对它们进行功能及表达通路分析,发现FOS、JUN和NR4A1参与耐药相关的PI3K/AKT信号通路、MAPK信号通路及Wnt信号通路,可能和喉癌多药耐药有关,推测这三种基因可能是通过促进肿瘤细胞增殖、抑制凋亡发挥抗化疗的作用。结论:喉癌干细胞与多药耐药有关,并且可能是通过FOS、JUN和NR4A1基因通过促进细胞增殖、抑制凋亡发挥作用,但具体功能及作用机制仍需进一步实验验证。