松茸菌液体发酵及多糖抗肿瘤活性的研究

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本研究首先以松茸菌丝体产量为考察指标,采用单因素实验筛选出最适碳氮源,确定最佳碳源和氮源为乳糖和酵母浸粉,在此基础上,通过Plackett-Burman和中心组合设计实验筛选最优培养基配方,得到最佳培养基配方:22.89g/L的酵母浸粉,0.073g/L的氯化钙,0.053g/L的硝酸钾,2g/L的硫酸镁,0.1g/L的氯化钠,4g/L的磷酸二氢钾,25g/L的乳糖,0.15g/L的维生素B1。验证实验结果表明,三次平行实验的菌丝体平均干重为10.40g/L,与预测值相比,误差为4.59%。表明该模型准确可靠。随后对松茸的摇瓶发酵条件进行了初步优化,采用单因素实验,对初始pH值、种龄、接种量、装液量、温度、转速和发酵时间进行了最佳数据的筛选,得到了最佳培养条件为:pH值6、温度26℃、发酵时间5天、转速150r/min、种龄5天、接种量7%、装液量100mL。同时以松茸菌丝体多糖提取率为考察指标,对超声提取法和热水浸提法进行了优化,通过单因素实验确定超声提取工艺中的最适超声功率、超声时间和液料比,在此基础上进行三因素三水平的设计实验,确定了最佳的提取条件为:超声时间202.43s,超声功率430.43W,水料比为47.21:1,最优条件下多糖得率的最大值预测值为13.38756%。进行三次平行的验证实验得到平均提取率13.186%,与理论的预测值相比相对误差为1.503%。同样方法确定了最优的热水浸提工艺参数为:提取时间4.49h,水料比33.08:1,提取温度为91.95℃时,多糖得率的最大值预测值为12.8045%,进行三次平行的验证实验得到平均提取率12.84%,与理论的预测值相比,相对误差为0.277%。最后在最优的多糖提取工艺基础上,采用MTT法研究了松茸菌多糖对三种肿瘤细胞人类B16黑色素瘤细胞、人肝癌细胞SMMC7721、人宫颈癌细胞Hela的抑制率进行了初步研究。研究结果表明,该多糖能够在体外细胞模型中显著抑制人类B16黑色素瘤细胞、人肝癌细胞SMMC7721和人宫颈癌细胞Hela的增殖作用,且该抑制作用随多糖浓度的提高,呈现浓度依赖性。在多糖浓度为10mg/mL时,对三种肿瘤细胞的抑制率分别为63.54%、62.43%和57.81%。
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