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目的：明确转录因子Sp3对人宫颈癌细胞(Hela)、人胚肾细胞(HEK293)Ki-67基因启动子的转录调控。
方法：
1.Sp3真核表达载体pCMV-Sp3作用于人宫颈癌细胞(Hela)、人胚肾细胞(HEK293)，用荧光定量PCR检测Sp3的过表达对Ki-67mRNA的表达的影响，用双荧光素酶报告基因检测系统检测Sp3的过表达对质粒pGL4-BK235启动子转录活性的变化。
2.Sp3小干扰shRNA作用于人宫颈癌细胞(Hela)、人胚肾细胞(HEK293),用荧光定量PCR检测Sp3的表达下降对Ki-67mRNA的表达的影响，用双荧光素酶报告基因检测系统检测质粒pGL4-BK235启动子转录活性的变化。
3.将Sp3真核表达载体pCMV-Sp3及Sp1真核表达载体pN3-Sp1共转染Hela细胞、HEK293细胞，用双荧光素酶报告基因检测系统检测质粒pGL4-BK235启动子转录活性的变化。
结果：
1．过表达转录因子Sp3显著抑制Hela、HEK293细胞Ki-67mRNA表达水平(P＜0.05)，与pCMV-Sp3共转染的质粒pGL4-BK235启动子活性也有不同程度的降低，在Hela、HEK293两种细胞中的启动子活性分别为未行共转染的BK235的55.8％、45.6％。
2.Sp3 shRNA作用于Hela、HEK293细胞其Ki-67mRNA的表达量均有增加(P＜0.05)，与Sp3 shRNA共转染的质粒pGL4-BK235启动子活性也有不同程度增加。在Hela、HEK293细胞中分别升至未行共转染的BK235的1.21倍、1.24倍。
3.pCMV-Sp3与pN3-Sp1以不同比例共转染于Hela、HEK293细胞，对质粒pGL4-BK235启动子转录活性的影响是：Sp3与Sp1的比值下降诱导Ki-67基因的表达，比值升高抑制Ki-67基因的表达。
结论：Sp3真核表达质粒pCMV-Sp3可以通过增加Sp3蛋白的表达来抑制Ki-67基因的启动子活性。Sp3小干扰Sp3 shRNA可通过抑制Sp3蛋白的表达来增高Ki-67基因的启动子活性。转录因子Sp3蛋白可能通过竞争Sp1在Ki-67基因核心启动子位置上的结合位点来抑制Ki-67基因的启动子活性，对Ki-67基因有负性调控作用。