抗白粉病的黑麦6RL微小染色体结构简析

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小麦是我国乃至世界人类的主要食物来源,小麦白粉病是目前小麦生产上的重要病害之一。黑麦6R染色体带有白粉病抗性基因,目前仍具有抗性。本研究在前期获得的抗白粉病黑麦6RL微小染色体附加系基础之上,利用ND-FISH技术和分子生物学技术,对附加系中微小染色体的结构及减数分裂行为进行了初步分析。对6RL微小染色体附加系的辐射后代进行了大量的分子细胞学鉴定。同时对材料进行了田间白粉病抗性鉴定。获得了以下结果:1、利用SLAF-seq技术,开发1086对引物,从这些引物中,获得黑麦Kustro来源的6RL微小染色体特异的分子标记19对。2、对其中16对标记的扩增产物进行克隆、测序,成功获得16条序列,这16条序列长度在200-464 bp之间。利用GrainGenes数据库中的BLAST工具,将这16条序列与黑麦基因组的Scaffold序列进行比对分析,有8条序列分别与数据库中已登录的5条黑麦6R Scaffolds序列有98%以上的相似度。3、这5条Scaffolds分别为Lo7v2scaffold453717 6R、Lo7v2scaffold4845826R、Lo7v2scaffold445202 6R、Lo7v2scaffold451612 6R和Lo7v2scaffold445253 6R。它们所含碱基序列长度分别为1879bp、954bp、47346bp、4446bp和17519bp。并且Lo7v2scaffold445202 6R、Lo7v2scaffold451612 6R和Lo7v2scaffold445253 6R与GenBank中已登录的小麦功能基因序列(GenBank:CF133726.1,GR504306.1和HX057614.1)有较高的同源性。4、利用ND-FISH技术对6RL微小染色体减数分裂行为及6RL微小染色体传递规律进行分析发现:大多数6RL微小染色体在减数分裂期间出现未正常配对、提早分离、落后的情况;在同一小麦背景的不同植株间,6RL微小染色体的传递频率、正常配对的频率也存在差异;并且在不同的小麦遗传背景中,6RL微小染色体的传递也存在差异。5、利用着丝粒探针Oligo-CCS1和Oligo-pAWRC.1对黑麦6RL微小染色体进行ND-FISH分析。结果发现在6RL微小染色体的着丝粒区域,探针Oligo-CCS1和Oligo-pAWRC.1的信号均被检测到,表明微小染色体具有着丝粒结构。6、对含1对6RL微小染色体的植株14T-154的种子进行辐射,然后利用19对6RL微小染色体特异引物对辐射种子后代进行检测。在117个辐射后代植株中,有79个植株只有部分引物扩增出产物,表明这79个植株中的6RL微小染色体发生了结构变异。7、利用ND-FISH技术对这79个植株的1428个后代植株进行鉴定,检测到1个植株16T-7-1含有一个结构变异的6RL微小染色体。还检测到16T-379-1、16T-379-4、16T-379-6、16T-379-8、16T-379-9、16T-379-11、16T-379-13、16T-379-14、16T-380-2和16T-380-3共10个植株含有6D/6RL小片段易位染色体,这10个植株都高抗白粉病。小片段易位染色体中,6RL微小染色体被分为两个更小的片段,分别易位到6D染色体的短臂和长臂上。以上研究结果对黑麦6RL携带的白粉病抗性基因在小麦育种中的应用提供了很好的材料基础,也为进一步研究6RL微小染色体的结构和功能奠定了基础。
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