论文部分内容阅读
目的:研究β-榄香烯对人分化型甲状腺癌(Differentiated thyroid cancer,DTC)中TPC-1、K1以及FTC133细胞系增殖、凋亡、周期、侵袭、血管生成以及能量代谢的影响,为β-榄香烯在DTC中的治疗作用提供理论依据。方法:选择人乳头状甲状腺癌(Papillary Thyroid Carcinoma,PTC)中TPC-1、K1细胞系以及滤泡状甲状腺癌(Follicular Thyroid Carcinoma,FTC)中FTC133细胞系为研究对象,以不同浓度β-榄香烯分别作用于三个细胞系,采用CCK8比色法分析其对细胞增殖能力的影响;应用AnnexinV-FITC/PI流式双染法检测对细胞凋亡的影响;应用PI单染法检测对细胞周期的影响;通过Transwell小室法检测对细胞侵袭能力的影响;Western blot检测细胞周期、凋亡相关蛋白以及VEGF A的表达情况;利用Seahorse能量代谢分析仪测定该药对细胞糖酵解和线粒体呼吸的影响。结果:1.β-榄香烯对DTC细胞增殖能力的影响CCK8结果显示,经β-榄香烯处理后,TPC-1、K1和FTC133细胞系的增殖率均下降,且呈时间-浓度依赖性。2.β-榄香烯对DTC细胞凋亡的影响AnnexinV-FITC/PI流式结果显示,当β-榄香烯浓度分别为40、60μg/ml时,TPC-1细胞凋亡比例升高,且差异有统计学意义(P<0.05);当β-榄香烯浓度分别为20、40μg/ml时,K1细胞凋亡比例升高,且差异有统计学意义(P<0.05);当β-榄香烯浓度为40、60μg/ml时,FTC133凋亡比例高于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05)。3.β-榄香烯对DTC细胞周期的影响PI单染流式结果显示,当β-榄香烯浓度为60μg/ml时,TPC-1细胞在G1期所占比例显著增高(P<0.05);当β-榄香烯浓度为10、20和40μg/ml时K1细胞在G2/M期所占比例显著增高(P<0.05);当β-榄香烯浓度为60μg/ml时,FTC133细胞在G1期所占比例显著增高(P<0.05)。4.β-榄香烯对DTC细胞侵袭能力的影响Transwell小室法结果显示,经β-榄香烯处理后,TPC-1、K1以及FTC133细胞穿过基质胶的细胞数均明显减少,呈剂量依赖性(P<0.05)。5.β-榄香烯对DTC细胞周期、凋亡相关蛋白以及VEGF A蛋白表达水平的影响Western Blot结果显示,经β-榄香烯处理后,TPC-1细胞中周期相关蛋白CDK2、CDK6、CyclinE表达减少,凋亡相关蛋白Caspase8、裂解的Caspase9表达增多,bcl-2表达减少。K1细胞中周期相关蛋白CDK1、CyclinB1表达减少,Caspase8表达水平无明显差异,裂解的Caspase9表达增多,bcl-2表达减少。FTC133细胞中周期相关蛋白CDK2、CDK6、CyclinE表达减少,Caspase8表达水平无明显差异,裂解的Caspase9表达增多,bcl-2表达减少。经β-榄香烯处理后,TPC-1、K1以及FTC133三个细胞系中VEGF A蛋白表达水平均降低(P<0.05)。6.β-榄香烯对DTC细胞能量代谢的影响Seahorse能量代谢分析仪结果显示,经β-榄香烯处理后,TPC-1、K1以及FTC133三个细胞系的ECAR值和OCR值均降低,且糖酵解基础值、糖酵解最大值、基础有氧呼吸值、最大呼吸商和ATP产生量均降低,呈剂量依赖性(P<0.05)。结论:β-榄香烯对DTC有抑制作用,其机制可能与抑制细胞增殖、促进细胞凋亡、发生周期阻滞、抑制细胞侵袭能力以及减少血管生成和能量代谢有关,因此β-榄香烯有潜力成为DTC的一种新疗法。