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目的:尿液中的exosomes是一种低密度的固相成分,内含蛋白质、脂质以及微RNA等成分。尿exosomes蛋白质一方面来源于泌尿系统,另一方面来源于循环系统,因此,被认为携带有丰富的生理或病理生物标志物信息,其蛋白质成分的变化可能反映泌尿系统和全身性疾病的病理过程。同时又因为尿能够无创地大量获得,因此尿蛋白质组学研究日益受到重视。本文通过比较正常对照者和NSCLC患者尿中exosomes蛋白质组,筛选可能存在于尿exosomes中的与NSCLC有关的特异性蛋白质,希望为临床NSCLC的早期诊断提供新的实验依据。方法:本研究以超速离心法分离正常人和NSCLC患者尿中exosomes,通过电镜对exosomes进行鉴定,运用1D SDS-PAGE对exosomes蛋白质组进行分离,分别从凝胶上切取正常对照组和疾病组45KD～35KD条带,胰蛋白酶酶解后,进行HPLC-CHIP-MS/MS分析,串联质谱数据进入UniProtKB/SWISS-PORT数据库搜索,找出差异蛋白。结合western blot技术和免疫组化技术分析鉴定搜索得到的差异蛋白——富亮氨酸α-2-糖蛋白(LRG1)。结果:通过观察exosomes的定性电镜负染照片,可知尿来源的exosomes小体为扁平或球形小体,直径主要在60nm左右。通过UniProtKB/SWISS-PORT数据库搜索,从尿中exosomes蛋白质组45KD～35KD条带中共鉴定出18种蛋白质,其中,11种从NSCLC患者组中鉴定,3种从正常人和NSCLC患者样品中鉴定,4种从正常人样品中鉴定。通过运用western blot技术和免疫组化技术,发现LRG1蛋白在NSCLC患者尿液exosomes和肺癌组织中均有较高表达。结论:exosomes对蛋白质成分具有选择性的富集作用,由于肾小球滤过作用的分子量限界为60kD,NSCLC患者尿中exosomes电泳结果出现的45KD～35KD条带的蛋白质既有可能来源于泌尿系统,也可能来源于循环系统,故本实验研究的重点在这个条带。运用1-D SDS-PAGE/HPLC-CHIP-MS-MS/UniProtKB/SWISS-PORT数据库相结合的分析策略分析45KD～35KD条带中的差异蛋白。在这个条带中共鉴定出的18种蛋白质,其中,11种从NSCLC患者组中鉴定,3种从正常人和NSCLC患者样品中鉴定,4种从在正常人样品中鉴定。本研究更为注意从NSCLC患者的尿exosomes中鉴定出的富亮氨酸α-2-糖蛋白(LRG1)—LRG家族的成员之一。既往的研究工作表明,LRG参与了蛋白质相互作用、信号转导、细胞粘附等重要的生物学过程和病理过程,在粒细胞分化过程中也发现LRG1的表达。LRG1不仅在NSCLC患者尿液exosomes中的含量明显增高,而且在临床NSCLC患者肿瘤组织中的表达升高,提示了NSCLC患者尿液exosomes中的LRG1可能来源于肿瘤组织,LRG1可能是一种NSCLC相关肿瘤标志物的候选分子。