玉屏风多糖对小鼠派氏结组织结构及免疫功能影响的研究

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玉屏风散是由《中国药典》和《中国兽药典》收载的经典方剂,其有效部位群玉屏风多糖(Yupingfeng polysaccharides,YPF-P)具有抗病毒、增强机体免疫力等多种生物学活性。本课题组前期研究发现,肠黏膜为其作用的靶部位,YPF-P可有效增强小鼠肠黏膜免疫功能,但其免疫调节机制尚未阐明。本论文以肠道黏膜免疫系统中的免疫诱导部位派氏结(Peyer’s Patches,PPs)为研究对象,并针对PPs组织结构及免疫调节功能的变化,探讨YPF-P对肠黏膜免疫系统的免疫调控机制。本论文分为体内动物试验和体外细胞试验两部分进行,体内动物试验对比研究了正常小鼠、不同剂量YPF-P免疫抑制小鼠及YPF-P阳性对照小鼠PPs组织结构的不同变化,旨在探讨YPF-P对小鼠PPs的抗损伤与保护作用;体外细胞试验以细胞培养技术为基础,观察PPs淋巴细胞增殖和活化、细胞因子水平及淋巴细胞亚群等指标的变化,旨在探讨YPF-P对小鼠PPs淋巴细胞免疫功能的影响。本论文的研究结果可进一步阐明YPF-P对小鼠肠黏膜免疫调节机制,为YPF-P的研发和应用提供理论指导和试验支撑,具有重要的理论意义和应用价值。本研究从以下几个方面进行:首先,96只SPF小鼠,随机分为6组:空白对照组(0.2 mL生理盐水)、YPF-P阳性对照组(YPF-P 200 mg/Kg)、环磷酰胺(Cyclophosvnamide,Cy)免疫抑制组(Cy 80 mg/Kg)及低、中、高剂量YPF-P组(100、200、400 mg/Kg YPF-P),饲喂1周,取小肠PPs,常规切片HE染色后应用图像分析技术检测PPs形态结构的变化,免疫组化鉴定PPs中TLR 4表达的变化,初步探讨YPF-P对小鼠小肠免疫诱导部位PPs的功能效应。其次,体外分离小鼠PPs并制备PPs淋巴细胞悬液,加药,运用细胞培养技术,MTT法检测PPs淋巴细胞加入Con A协同不同剂量YPF-P(0.5、1、2、4、8 mg/m L)在作用不同时间(0、8、12、16、24、36 h)后的增殖变化,探讨YPF-P对PPs淋巴细胞的增殖效应。然后,ELISA试剂盒检测PPs淋巴细胞悬液中细胞因子IL-2、IL-4、IFN-γ的水平变化,NO水平的变化,探讨YPF-P对PPs淋巴细胞相关细胞因子的调控效应。最后,通过流式细胞术检测PPs淋巴细胞中CD3+、CD4+、CD19+和CD8+细胞的比例变化,进行淋巴细胞的亚群分析,进一步探讨YPF-P对PPs淋巴细胞的调控机制。结果发现,YPF-P能改善免疫抑制小鼠体重,增加小鼠小肠PPs的体积和数量,能缓解和修复Cy所导致的小肠PPs免疫损伤,且能明显促进PPs淋巴组织增生和TLR 4的表达,不同剂量的YPF-P均能增强PPs淋巴细胞的活性,对PPs淋巴细胞增殖活化有明显促进作用,同时,YPF-P可明显促进小鼠PPs淋巴细胞产生和分泌IL-2、IL-4、IFN-γ及NO,可改变小鼠PPs淋巴细胞中T、B淋巴细胞的比例并显著提高CD4+/CD8+的比值。综上,本研究表明,YPF-P能通过对小鼠小肠免疫诱导部位PPs的有效调控,进而增强肠黏膜免疫功能。
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