第一部分目的:探索缺氧条件下不同时间段RPE细胞中HGF和VEGF的表达及外源性HGF蛋白对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)增殖、迁移和体外血管生成能力的影响。方法:体外培养人RPE细胞,取第8～12代生长良好的传代细胞用于实验。用3000μM氯化钴进行缺氧处理,缺氧处理Oh、3h、6h、12h、24h后,继续培养12h,采用 Real-time PCR 法和 Western 检测 RPE 细胞 VEGF 和 HGF 的 mRNA水平和蛋白表达水平。将HUVEC细胞随机分为正常对照组,1Ong/ml HGF蛋白处理组和25ng/ml HGF蛋白处理组,采用MTT法、划痕试验和transwell迁移试验、体外血管生成试验分别检测不同HGF浓度对HUVEC的增殖、迁移和管型形成能力的影响。结果:Real-time PCR结果显示,与正常对照组相比,缺氧处理RPE细胞12h后VEGF及HGF水平到达最高值,与Oh差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);Western blot结果显示缺氧处理6h后VEGF蛋白表达最高,12h时HGF蛋白表达最多。给予1Ong/ml HGF和25ng/ml HGF蛋白处理后HUVEC在细胞增殖,管腔形成能力和细胞迁移能力上较正常对照组均有明显增强,但HGF蛋白处理组间无明显差异。结论:缺氧可以诱导RPE细胞中HGF及VEGF的表达增高,外源性HGF对HUVEC细胞增殖、迁移及体外血管生成有促进作用。第二部分目的:探究共培养条件下RPE细胞中HGF的表达对HUVEC增殖、迁移和体外血管生成能力的影响。方法:体外培养人RPE细胞,取第8～12代生长良好的传代细胞用于实验。将同代RPE细胞随机分为正常对照组,HGF siRNA处理组和siRNA阴性对照组,将处理的RPE细胞和正常的HUVEC细胞分别接种于transwell小室的下室和上室,于37℃培养箱中继续培养12h、24h、48h。Real-timePCR法检测RPE细胞中VEGF和HGF基因的mRNA水平,MTT法、划痕试验和transwell迁移试验、体外血管生成试验分别检测HUVEC细胞的增殖、迁移和管型形成能力。结果:与正常对照组相比,siRNA阴性对照组的VEGF和HGF基因表达没有明显变化;与siRNA阴性对照组相比,HGF siRNA处理组的VEGF和HGF基因的mRNA水平分别下降了 57%、70%。MTT结果显示,siRNA阴性对照组的HUVEC细胞活力没有明显变化,共培养24h、48h后HGF siRNA处理组的细胞活力明显减弱;划痕试验和transwell迁移试验结果显示,HGF siRNA处理组的细胞迁移能力明显受到抑制,体外血管生成试验结果显示,HGF siRNA处理后明显抑制HUVEC的体外血管生成能力。结论:HGF具有促进HUVEC细胞增殖、迁移及体外血管生成的作用,对其在眼部新生血管疾病的作用机制还需进一步研究。