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缺血性脑卒中(cerebral ischemic stroke,CIS),又称脑梗死(cerebral infarction,CI),是由各种原因导致的一处或多处供应大脑某区域的血管栓塞或闭塞,导致阻塞血管相应供血区脑组织发生血液供应障碍、氧气供应缺乏,进而出现与组织损伤区域相对应的神经功能障碍或缺失的表现,严重者甚至可导致死亡。在全球范围内,CIS都是成年人致死或致残的重要原因。目前,尽管CIS后静脉和动脉内溶栓已广泛应用于临床,但在临床应用中仍然存在一些限制。我们迫切需要找到一种新的神经保护剂或恢复剂,降低CIS的损伤程度、延缓其病理进程、促进梗死后神经功能的恢复。天然右旋龙脑(natural borneol,NB)是一种脂溶性单萜类物质,具有促透皮作用,可增加血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)通透性。在CIS的治疗中,NB可以通过改善缺血脑组织的能量代谢,抑制氧化应激,减轻炎症反应,起到保护神经系统的作用。但是其增加BBB通透性的时间效应和其对CIS保护作用的机制尚未完全明确。在本次研究中,我们将通过实验探寻NB增加BBB通透性的时间效应,找寻其BBB开放的达峰时间,并探究其对于CIS保护作用的机制,从而为CIS的临床治疗提供新的药物选择。研究目的:1.研究天然右旋龙脑在小鼠体内对血脑屏障通透性的作用的时间效应。2.以临床缺血性脑卒中治疗常用药依达拉奉作为参照,评价天然右旋龙脑对缺血性脑卒中的治疗的效果及作用机制。研究方法:1.利用伊文思蓝(Evan’s blue,EB)作为示踪剂,分别检测腹腔注射NB 0 min、10 min、30 min、60 min、120 min、480 min时进入不同脑组织的EB含量,探寻腹腔注射NB对BBB通透性变化的时间效应。2.采用光化学法制备昆明小鼠左侧大脑局部缺血模型。受试小鼠随机分成NB治疗组和ED治疗组,并设置假手术组(Sham)和模型组(Model)。在小鼠模型成功建立后,并依据分组经过不同处理。24 h后,采用Zea Longa评分法、圆筒试验、平衡木试验以及足失误试验对受试小鼠进行神经功能的评价;通过TTC染色法,观察和对比小鼠大脑梗死灶的体积;采用干-湿重称量法检测小鼠大脑组织含水量,评价脑梗死小鼠脑组织的水肿情况;通过免疫荧光染色法检测Neuro-N,评价神经元凋亡情况;通过免疫荧光染色法检测缺血侧脑组织中caspase-3和MMP-9含量的改变。结果:1.腹腔注射NB 0 min、10 min、30 min、60 min、120 min、480 min后测定大脑、小脑、脑干中EB的含量。结果显示,在本实验选取的6个时间点中,大脑和小脑在腹腔注射NB 30 min后EB含量最高,脑干在腹腔注射NB 60 min后,EB含量最高。2.光化学法CIS模型建立24 h后,与模型组相比,NB治疗组小鼠的神经功能的缺损情况均得到明显改善。TTC染色结果显示,在模型建造后24 h,NB治疗组的脑梗死体积与模型组相比明显降低。在模型建造24 h后,与模型组相比,NB治疗组的脑组织含水量明显减少;采用免疫荧光的方法检测NB在CIS中对于脑组织的保护机制,染色结果显示,在模型组中,Neuro-N表达水平较低,caspase-3和MMP-9呈高表达,而在NB治疗组,Neuro-N的表达水平较模型组明显升高,caspase-3和MMP-9表达水平明显降低。结论:1.天然右旋龙脑可时间动态性调控血脑屏障通透性。2.天然右旋龙脑可改善缺血性脑卒中后神经功能缺损,减轻脑组织水肿,降低脑部梗死体积,增加缺血半暗带血液灌注。3.天然右旋龙脑治疗可减少神经元凋亡。