目前,人用狂犬疫苗体外效力评估多采用酶联免疫吸附试验（ELISA）,然而未能满足现代化疫苗质量控制需求。为实现快捷、稳健评估狂犬病毒疫苗效力,本研究建立了基于磁性微球的狂犬疫苗糖蛋白化学发光免疫分析（CLIA）定量检测试剂。狂犬病毒糖蛋白单克隆抗体包被于磁性微球并对狂犬病毒进行捕捉,标记有吖定酯的另一糖蛋白抗体为信号示踪剂。性能评估实验结果显示自制试剂具有灵敏度高、准确度高、精密度好、检测范围广等优点,同时大幅缩短检测时间并有效规避了人工误差。检测疫苗样本时,该检测试剂与NIH法测值具有良好相关性,并与狂犬病毒糖蛋白时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）检测结果具有一致性,相较于TRFIA,CLIA检测试剂检测性能更优。上述结果显示,建立的基于磁性微球的CLIA检测试剂各项指标均达到检测试剂使用要求,为狂犬疫苗生产提供简便、迅速的体外质量控制手段,并且有望对体内检测NIH动物法进行补充甚至替代。尽管已有部分狂犬病毒疫苗体外效力评估试剂面世,但不少体外检测试剂与NIH动物法的检测结果相关性差,开发与狂犬病毒疫苗NIH动物法高度匹配的体外效力检测试剂仍具有挑战。在前期研究中课题组通过构建狂犬病毒糖蛋白抗体库,随机配对组合所有高亲和力抗体,构建分析体系后逐一与NIH法比对,最终成功获取最优抗体组合,但此抗体筛选策略低效、成本高昂,周期漫长且工作量巨大。通过回顾分析,本研究提出了一种筛选体外效力评估检测试剂所需理想抗体的新策略,不同于传统免疫分析试剂筛选高亲和力的抗体,亦有别于学者提出的筛选识别空间构象表位的抗体,而是优先筛选高中和效价的抗体。为验证这一策略的合理性,本研究选取具有代表性的、不同特征的4株抗体,配对组合构建4种CLIA检测体系,平行检测78份包含4种株系的狂犬病毒疫苗样本,并将检测结果与NIH法测值进行比对。结果显示,对于体内-体外效力评估一致性而言,狂犬病毒糖蛋白抗体的中和效用远比抗体识别表位的结构特征更具有决定性。由2株强中和作用抗体组合构建的体外检测试剂与NIH动物法匹配度最高,而中和抗体与非中和抗体组合的匹配度高于2株非中和抗体的组合,因此优先筛选高中和效价的抗体的策略是合理的。应用新策略将大大提升构建体外效力评估检测试剂的成功率,并大幅缩短研发周期,有效帮助研究者构建稳定、可靠的体外效力检测体系,以实现对体内效力评估的补充甚至替代。