人工血液制品的开发利用——对人血红蛋白的提纯、改造制备研究

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目的:建立一种有效的实验方法,从过期的全血及血液制品(少浆全血;浓缩红细胞;洗涤红细胞)中,提取人天然无基质血红蛋白(SFHb)。方法:首先,利用甲苯萃取法有效去除血液中的有形成分(细胞膜等);其次,采用Millipore公司的超滤装置分离提纯人血红蛋白,得到血红蛋白纯品;另外尝试Triton-X100在提纯人血红蛋白纯品中的应用。然后建立合理的实验方法(电泳、紫外---可见光扫描、反相高效液相、库尔特血液分析系统、ABO血型、无菌及热原试验等),确定纯化产品的产率、浓度、纯度;同时形成血红蛋白提纯品自检鉴定标准。结果:应用上述方法,测得SFHb(4批次)的平均浓度为:14.6 g/dl;血型凝集实验:阴性;无菌、热源实验阴性,纯度为:98.3%;紫外扫描图谱、反相高效液相色谱峰谱与对照品吻合;15%SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示,产品呈均一分布,86.5%电泳迁移率约为14.4kD(Marker),为血红蛋白亚基单体,10.2%电泳迁移率近似于31.0kD(Marker),为血红蛋白二聚体;聚丙烯酰胺凝胶电泳结果不仅确定了血红蛋白蛋白质的亚基组成及分子量,而且表明血红蛋白的电泳迁移率与对照品(简称CHb)完全一致。结论:可制备高浓度、高纯度的SFHb(简称PHb)。
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