论文部分内容阅读
研究背景:结直肠癌(Colorectal Cancer,CRC)是人类常见的消化道恶性肿瘤之一,也是严重威胁人类健康的主要疾病之一。而CRC死亡率居高不下的原因主要与其术后高复发和高转移密切相关。近年报道吞噬和运动蛋白(engulfment and cell motility proteins,ELMO)家族在肿瘤细胞侵袭转移中扮演了重要的角色。因此,深入探讨CRC复发转移的分子机制,寻找其关键标志分子,对早期诊断、预后判断、靶向干预治疗等具有重要的临床意义。目的:检测ELMO3在人CRC组织中的表达情况并分析其与CRC的临床病理参数间的关系及意义。在体外实验中,探讨ELMO3的表达变化对结肠癌细胞迁移、侵袭、和细胞增殖等生物学行为的影响。方法:1、应用RT-qPCR和Western-blot方法分别检测45例CRC组织及其相匹配的正常结直肠组织中的ELMO3 mRNA和蛋白表达水平。以及采用免疫组化(immunohistochemical,IHC)检测ELMO3蛋白在CRC组织中的表达位置和阳性表达率,并分析ELMO3的表达水平与CRC的临床病理参数的关系和意义。2、在体外实验中,利用小RNA干扰技术来沉默结肠癌细胞中的ELMO3表达,再通过划痕试验、Transwell小室迁移和侵袭实验、MTS实验、流式细胞仪和聚焦荧光显微镜染色方法分别检测ELMO3表达变化对结肠癌细胞的迁移侵袭、细胞增殖、细胞周期和细胞骨架F-actin聚合等生物学行为的影响。结果:1、RT-qPCR、Western-blot和IHC检测结果均表明,CRC组织中ELMO3的mRNA和蛋白表达水平显著高于相匹配的正常结直肠组织,且ELMO3在发生淋巴结转移的CRC组织中的表达水平明显高于未发生淋巴结转移的CRC组。2、结合CRC患者临床病理参数进行分析,ELMO3表达水平与CRC的肿瘤大小、分化程度、浸润深度、淋巴结转移、远处转移和TNM分期有显著性差异,而与性别、年龄均无显著性差异。3、体外抑制结肠癌细胞株HCT116细胞中的ELMO3表达水平,可显著抑制细胞迁移、侵袭和细胞增殖能力以及细胞骨架F-actin的聚合水平,并诱导细胞周期G1期阻滞。结论:1、ELMO3在CRC组织中表达上调,且ELMO3表达水平与CRC肿瘤大小、分化程度、浸润深度、淋巴结转移、远处转移和TNM分期有显著性差异。2、ELMO3能够促进HCT116细胞的迁移、侵袭、增殖能力以及细胞骨架F-actin的聚合等作用。