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目的肝癌世界上常见的六种恶性肿瘤之一,是导致癌症相关死亡的第三大原因。中国是世界上肝癌患者最多的国家,给人民健康和社会经济带来了沉重的负担。肝癌隐匿性起病,容易出现复发和转移,并且治疗方案选择有限,患者预后差。因此,寻找与肝癌预后相关的生物标志物,对于改善肝癌患者的预后具有重要意义。方法1.GOT2基因在肝癌细胞中的表达及功能研究:（1）在ICGC数据库中下载LIRI-JP数据集,进一步验证GOT2基因在肝癌中的表达水平及其与预后的关系。（2）采用实时荧光定量PCR检测MHCC97L、MHCC97H、HCCLM3、Huh-7、Hep3B和Hep G2等6株肝癌细胞系中GOT2基因的m RNA表达水平;（3）使用过表达和敲低GOT2基因的慢病毒载体转染Hep G2细胞系,并用嘌呤霉素进行筛选,构建稳定敲低和过表达GOT2基因的细胞系,采用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹实验（Western blot,WB）检测转染效率;（4）通过CCK-8细胞增殖实验和平板克隆形成实验体外检测GOT2基因表达水平对细胞增殖活性的影响;（5）通过Transwell细胞迁移和侵袭实验检测GOT2基因表达水平对细胞迁移和侵袭能力的影响。2.GOT2基因表达水平对肝细胞癌自噬的影响及其潜在机制研究:（1）WB检测自噬相关蛋白LC3、P62的蛋白表达水平,评估GOT2基因表达水平对肝癌细胞自噬的影响;（2）使用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA,5m M）干预转染细胞12h以抑制细胞自噬,并通过CCK-8细胞增殖实验检测干预前后细胞的增殖活性,探讨自噬对细胞增殖活性的影响;（3）WB检测mTOR通路相关蛋白mTOR、p-mTOR的蛋白表达水平,评估GOT2基因表达水平对mTOR通路活性的影响;（4）使用mTOR通路抑制剂雷帕霉素（100n M）干预转染细胞12h以抑制mTOR通路活性,WB检测自噬相关蛋白LC3、P62的蛋白表达水平,探讨mTOR通路活性对细胞自噬的影响。结果1.GOT2基因在肝癌细胞中的表达及功能研究:（1）GOT2基因在肝癌组织中表达下调,其低表达与患者较差的总生存时间相关。（2）GOT2基因在MHCC97L、MHCC97H、HCCLM3等转移能力较强的细胞株中相对表达量较低,而在Huh-7、Hep3B、Hep G2等转移能力较弱的细胞株中相对表达量较高,其中HepG2细胞株中GOT2基因的相对表达量最高。（3）转染结果显示,相较于敲低对照组（sh-NC）,敲低组（sh-GOT2）中GOT2基因的m RNA表达水平下降69%（t=22.600,P＜0.001）,蛋白表达量下降55%（t=14.410,P＜0.001）;相较于过表达对照组（OE-NC）,过表达组（OE-GOT2）中GOT2基因的m RNA升高约2倍（t=7.757,P＜0.001）,蛋白表达量升高1.4倍（t=2.880,P＜0.05）,说明成功构建稳定敲低和过表达GOT2基因的细胞株。（4）CCK-8细胞增殖实验结果显示,sh-GOT2组在培养2天后,肝癌细胞的OD值显著高于sh-NC组;OE-GOT2组在培养4天后,肝癌细胞的OD值显著低于OE-NC组,差异均具有统计学意义（P＜0.05）;平板克隆形成实验结果显示,sh-GOT2组的细胞克隆数多于sh-NC组,差异有统计学意义（t=8.819,P＜0.001）;OE-GOT2组的细胞克隆数少于OE-NC组,差异有统计学意义（t=18.64,P＜0.001）。（5）Transwell迁移实验结果显示,sh-GOT2组诱导的迁移细胞明显多于sh-NC组诱导的迁移细胞,差异有统计学意义（t=8.193,P＜0.001）;而OE-GOT2组诱导的迁移细胞少于OE-NC组诱导的迁移细胞,差异有统计学意义（t=5.011,P=0.007）。（6）Transwell侵袭实验结果显示,sh-GOT2组诱导的侵袭细胞多于sh-NC组诱导的侵袭细胞,差异有统计学意义（t=11.510,P＜0.001）;而OE-GOT2组诱导的侵袭细胞少于OE-NC组诱导的侵袭细胞,差异有统计学意义（t=15.24,P＜0.001）。2.GOT2基因表达水平对肝细胞癌自噬的影响:（1）WB实验结果显示,与对照组相比,敲低GOT2基因后,LC3-II/LC3I的值显著增加（t=10.430,P＜0.001）,而P62蛋白表达下调（t=5.022,P＜0.01）。相反地,过表达GOT2基因后LC3-II/LC3I的值下降（t=6.591,P＜0.01）,P62蛋白表达水平升高（t=9.547,P＜0.001）。（2）加入自噬抑制剂3-MA后,sh-NC组和sh-GOT2组中LC3-II/LC3-I的值下降,P62蛋白表达水平升高,差异均具有统计学意义（P＜0.05）;CCK-8细胞增殖实验结果显示,加入3-MA后,sh-GOT2组中肝癌细胞的OD值显著下降（P＜0.05）。而sh-NC组中肝癌细胞的OD值无显著差异（P＞0.05）。（3）WB实验结果显示,与sh-NC组相比,sh-GOT2组中p-mTOR/mTOR的值显著下降（t=11.570,P＜0.001）。加入雷帕霉素后,sh-NC组中p-mTOR/mTOR的值显著下降（t=5.167,P＜0.01）,而LC3-II/LC3-I和P62蛋白表达水平没有显著差异（P＞0.05）;另外,加入雷帕霉素后,sh-GOT2组中p-mTOR/mTOR的值显著下降（t=5.274,P＜0.01）,同时,LC3-II/LC3-I的比值显著升高（t=2.793,P＜0.05）,P62蛋白表达水平显著下降（t=3.219,P＜0.05）。结论1.GOT2基因在肝癌组织中表达下调,其低表达与患者较差的总生存时间相关。2.GOT2基因在体外抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,可能是肝癌潜在的抑癌因子。3.敲低GOT2基因诱导肝癌细胞发生自噬进而促进癌细胞增殖。4.敲低GOT2基因可能通过抑制mTOR通路活性诱导肝癌细胞产生异常的自噬。