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皮肤癣菌病是由浅部真菌引起的一类人畜共患病,该病侵袭面广、发病率高、传播速度快、危害大,随着动物集约化养殖的发展,本病的危害将日趋严重。抗真菌化学药物在治疗该病中存在抗菌谱窄、易产生耐药性、毒副作用大和促使免疫力降低等难以克服的问题。本实验以前期筛选获得的抗皮癣病中药提取物复方为基础,研究了中药提取物主要指示成分的HPLC测定条件、乳膏剂基质组方及膏剂制备方法、人工感染须癣毛癣菌病家兔动物模型及制剂对动物模型的疗效、皮肤刺激性和急性毒性等。结果显示:1、使用HPLC对土荆皮、白鲜皮、苦参为主的复方中药提取液中指示成分及浓度进行了测定,确定了测定各成份所需色谱条件分别为:(1)棒酮、黄柏酮、土荆皮乙酸的色谱条件:AgilentC18(250nm×4.6nm,5μm),流动相:乙腈-水(含2‰磷酸),梯度洗脱时间与比例分配为0-30min:乙腈30%-80%;30-51min:乙腈80%-30%;流速:1.OmL/min;柱温:25℃;检测波长:梣酮、黄柏酮为236nm,土荆皮乙酸为260nm。(2)氧化苦参碱色谱条件:AgilentZORBAXNH2(5μm,4.6×250mm);流动相:乙腈-无水乙醇(80:20);流速:1.OmL/min;检测波长:220nm;柱温:27.7℃。(3)复方中药液中梣酮含量为11.54μg/mL,稳定性、重复性良好,RSD分别为1.22%、1.25%;加样平均回收率为100.26%,RSD为0.23%。2、采用正交试验设计筛选最佳乳膏基质组方,制备复方中药乳膏剂,并进行稳定性试验,应用HPLC法测定了膏剂中的主要指示成分。结果表明,最佳乳膏基质组成为十二烷基硫酸钠1.55g、单硬脂酸甘油酯3.45g、丙二醇8mL,尼泊金乙酯0.3g、硬脂酸6.8g、凡士林6.8g、液体石蜡3.4g,氮酮2.5mL,提取液成份稳定未发生改变,梣酮、黄柏酮、土荆皮乙酸和氧化苦参碱均可以检测到。3、建立人工感染须癣毛癣菌病家兔动物模型,进行药效试验,通过临床病变记分、病料真菌培养和组织病理观察,评价复方中药乳膏剂的药效。结果表明:用药22天后,各用药组病变症状消失,根据《兽药研究技术指导原则》判定为有疗效,复方中药乳膏剂高、中剂量疗效与西药特比萘芬基本一致,复方中药液与复方中药软膏剂低剂量组相似。4、按照《中药、天然药物局部刺激性和溶血性研究技术指导原则》,进行皮肤刺激性试验和急性毒性试验,观察了家兔完整皮肤、受损皮肤对复方中药乳膏剂的刺激反应和家兔的急性毒性反应。结果表明,复方中药乳膏剂对完整皮肤无刺激性、对破损皮肤有轻微刺激性;无毒副作用。