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背景急性淋巴细胞性白血病(ALL)是最常见的儿童恶性血液肿瘤,约占儿童急性白血病的75%-80%。多数ALL患者通过规范治疗可以达到长期无病生存,然而仍有一部分ALL患儿,特别是高危型患儿,复发或难以达到缓解。微小RNA (miRNA)与白血病的发生、发展、临床表现和预后有密切联系,在其发生中起促癌或抑癌的作用,在靶向分子治疗和预后评价方面具有良好的应用前景。目的检测儿童普通急性淋巴细胞性白血病(common-ALL)中niRNA的差异性表达,进一步研究差异性表达的miRNA-708调控的靶基因。方法研究对象为34例普通急性淋巴细胞性白血病患儿及5例行骨骼矫正手术并排除肿瘤和血液系统疾病患儿的骨髓样本,采用中国儿童血液病研究组2008(CCLG-2008)方案对其进行治疗及临床危险度分型。1.应用miRNA微阵列基因芯片技术筛选common-ALL患儿样本中miRNA的差异性表达,应用茎环实时定量聚合酶链反应(stem-loop RT-PCR)技术验证差异性表达的miRNA。2.应用生物信息学方法预测miRNA-708调控的靶基因,利用双报告基因检测技术鉴定miRNA-708调控的靶基因,通过实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹(Western blot)等方法在淋巴细胞和白血病细胞中进一步验证miRNA-708是否调控靶基因的表达。3.利用基因点突变和双报告基因检测技术验证miRNA-708与CNTFR的结合位点。结果1. miRNA微阵列芯片结果示：同正常对照组相比,在儿童普通急性淋巴细胞性白血病样本中检测的2006个niRNA中,miR-708、miR-210、miR-181b、 miR-345、miR-324-5p、miR-125b、miR-324-3p和miR-106b表达显著上调;miR-23、miR-27a和miR-23b表达显著下调。茎环实时定量PCR进一步验证示,miR-708、miR-210和miR-181b表达量为16.886±16.854、5.710±4.652及9.789±1.178,与正常对照组(1.872±0.339、1.276±0.531及1.005±0.080)相比表达均上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-27a和miR-345表达量为0.524±0.085及0.675±0.086,与正常对照组(1.123±0.066及1.204±0.143)相比均下调,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-708和miR-181b在高危组中表达水平为44.990±6.379和12.980±1.889,高于中危组和标危组(P<0.05)。2.通过生物信息学技术预测miR-708的靶基因,筛选出CNTFR、NNAT和GNG12三个预测靶基因进行验证。双报告基因检测结果示：转染miR-708模拟物(miR-708mimics)的人胚胎肾239细胞中CNTFR、NNAT和GNG12的表达水平均下降,而转染miR-708抑制剂其表达升高。在普通急性淋巴细胞白血病样本中,CNTFR、NNAT的mRNA表达水平较对照组相比显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。在Jurkat细胞中,同阴性对照组相比,转染miR-708mimics组CNTFR、NNAT和GNG12蛋白水平均有不同程度的下降,而转染]miR-708抑制剂(miR-708inhibitor)组CNTFR、NNAT和GNG12蛋白水平表达有不同程度的升高。3.通过点突变技术和双报告基因检测验证结合位点,结果示：miR-708与CNTFR的结合区域位于CNTFR mRNA3’-UTR端394～400bp。结论miRNAs的差异性表达在儿童普通型急性淋巴细胞性白血病发生发展过程中及其不同的临床分型的发生机制中存在重要的作用,其中niRNA-708是高危型common-ALL重要的调控因子。miRNA-708在白血病细胞中通过结合靶基因CNTFR、NNAT和GNG12的3’-UTR端,降低靶基因的表达水平。