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目的：研究一种新型组蛋白去甲基化酶在肝硬化中的作用,了解表观遗传学分子在人类疾病中广泛作用,探索此类分子作为疾病治疗潜在靶标的可能性。方法：1.对20对(肝硬化组织和肝正常组织)标本中RBP2的水平进行了免疫组化的检测,确定了RBP2在这些组织中表达的差异情况,并对结果进行了归纳分析,为研究其在肝硬化中的功能奠定基础。2.进行分子和细胞水平的实验,应用特异性的RBP2干扰RNA处理肝星形细胞,检测RBP2敲减后对于肝纤维化相关的α-SMA和vimentin表达的影响,然后用RBP2过表达的质粒转染细胞,检测α-SMA和vimentin在RNA和蛋白水平上的变化情况,确定RBP2是否对于上述两种分子有调控作用,同时用克隆形成实验检测了RBP2敲减对于肝星形细胞增殖的作用,并且用可以诱导肝纤维化的因素,如TGF-β来处理细胞,检测RBP2, α-SMA和vimentin的表达变化情况。先用特异性的RBP2干扰RNA预处理肝星形细胞,再用TGF-β来刺激,检测α-SMA和Ivimentin的表达,以及肝星形细胞增殖的变化,以此来确定TGF-3是否通过调控RBP2来调节α-SMA和vimentin的表达。具体方法如下：(1).利用Invitrogen公司的Lipofectamine2000把特异性的RBP2干扰RNA及其对照干扰RNA转入肝星形细胞LX-2中,72小时后收获细胞,用Trizol提取总RNA。随后用Fermontas公司反转录试剂盒反转录RNA为cDNA。以上面得到的cDNA为模板,再用Takara SYBR荧光定量PCR试剂盒检测(?)RBP2mRNA的表达水平,以确定其干扰效率；同时又检测α-SMA和vimentin mRNA的表达变化。蛋白水平的变化用Western Blot方法分析。(2).利用上述相同方法敲减RBP2的表达后,从培养液中取出细胞进行计数,每组300个细胞,用3ml培养基悬于六孔板中,在孵箱培养2周长出肉眼可见克隆后,固定细胞,利用吉姆萨染色,计算克隆的数目,即用克隆形成实验检测细胞分裂增殖能力的高低。(3).用罗氏公司的转染试剂把RBP2的高表达质粒及其对照质粒转入肝星形细胞LX-2中,48小时后,收细胞提取RNA,反转录后进行实时定量PCR的检测,确定α-SMA和vimentin mRNA的表达变化。蛋白水平的检测用Western Blot的方法。(4).用TGF-β来处理肝星形细胞LX-2,48小时后,收细胞提取RNA,反转录后进行实时定量PCR的检测,确定RBP2,α-SMA和vimentin mRNA的表达变化。蛋白水平的检测用Western Blot的方法。(5).先用特异性的RBP2干扰RNA处理肝星形细胞LX-2,24小时后,加入TGF-β继续处理48小时,收获细胞,提取蛋白和RNA,分别进行Western Blot和实时定量PCR的检测,确定RBP2,α-SMA和、(?)imentin蛋白和mRNA的表达变化。同时用同样方法进行克隆形成实验,检测肝星形细胞增殖能力的变化。3.用大鼠造肝硬化模型实验：购买15只适龄大鼠,随机分成三组,其中6只为正常对照组,另外9只为实验组。实验组大鼠饮用含10%酒精的水,并以高脂低蛋白的食物饲养,同时在皮下每4天注射一次混合液(40%CCl4和60%橄榄油的混合物),剂量为0.5ml/克；给与对照组大鼠正常饮食饮水并皮下注射相同剂量的生理盐水。每隔4天称量一次大鼠的体重。6周后,先用适量的麻醉药品将大鼠麻醉,再对其进行解剖,分离出肝脏和脾脏,并进行称重,记录好数据后,整理分析。分离出的肝组织一部分放于中性福尔马林中,以备包埋切片,做HE和免疫组化检测之用；另一部分冻于-80度冰箱,以提取RNA之用。结果：1.RBP2的蛋白水平在肝硬化组织中比肝正常组织中显著升高,免疫组化染色显示RBP2在肝硬化组织中阳性细胞个数显著增多。2.肝星形细胞LX-2转入特异性的RBP2干扰RNA72小时后,RBP2的mRNA和蛋白表达都显著降低,同时由于RBP2表达的减少,α-SMA和vimentin的表达也随之降低。提示RBP2可能通过调节α-SMA和vimentin的表达来参与肝纤维化和肝硬化的发生。3.通过克隆形成实验,我们发现肝星形细胞LX-2转入特异性的RBP2干扰RNA72小时后,细胞的克隆形成能力和对照组相比明显受到抑制。4.肝星形细胞LX-2转入RBP2高表达质粒48小时后,RBP2的mRNA和蛋白表达都显著上升,同时由于RBP2表达的增高,α-SMA和vimentin的表达也随之升高。5.用TGF-β处理肝星形细胞LX-248小时后,RBP2, α-SMA和vimentin的mRNA和蛋白表达都有较明显的升高。6.预先用特异性的RBP2干扰RNA下调RBP2的表达后,再用TGF-β处理肝星形细胞LX-2, α-SMA和vimentin的mRNA和蛋白水平的表达升高都得到了逆转,同时TGF-β使肝星形细胞增殖能力的提高也得到了逆转。7.大鼠肝硬化模型实验表明,实验组大鼠的肝组织出现了明显的肝硬化特征。实验组大鼠的肝脏指数(肝脏重量/体重)和脾脏指数(脾脏重量/体重)都明显高于对照组。RBP2mRNA和蛋白的表达在实验组大鼠的肝硬化组织中都明显提高。结论：一些肝硬化的诱导因子,如TGF-β可能通过RBP2来调节与肝硬化相关的分子α-SMA和vimentin的表达来促进肝硬化的发生。RBP2可能会成为诊断和治疗肝硬化的潜在靶标。