论文部分内容阅读
目的MicroRNAs (miRNAs)是一类在植物、动物和病毒中广泛存在的非编码小分子RNA,长约21-23nt,高度保守,与特定mRNA3’-UTR结合,在转录后水平调节基因的表达。成熟的miRNAs与其他蛋白质一起组成RISC(RNA Induced Silencing Complex),通过结合到靶基因mRNA的3’-UTR,从而引起靶mRNA的降解或者翻译抑制。miRNAs参与调控许多重要的生物学过程,在肿瘤形成过程中起着重要作用。甲状腺乳头状癌(Papillary thyroid carcinoma, PTC)是最常见的一种内分泌恶性肿瘤,约占甲状腺癌的80%,发病率逐年上升,已跃居女性恶性肿瘤第8位,严重威胁人类的生命健康,是内分泌系统肿瘤领域的研究热点之一。然而,甲状腺乳头状癌的发病机制至今仍不明确,进一步探索其发病机制对提高诊断和治疗有着十分重要的意义。本研究应用microarray芯片技术筛选甲状腺乳头状癌miRNAs的差异性表达,发现与甲状腺乳头状癌相关的miRNAs,并探讨其与甲状腺乳头状癌发生发展的关系,为进一步研究甲状腺乳头状癌的分子发病机制提供理论基础和研究依据。方法3例甲状腺乳头状癌标本选白2010年6月郑州大学第一附属医院甲状腺外科手术治疗的患者,分别提取RNA,应用μParafloTM微流体芯片对其进行分析,初步建立起甲状腺乳头状癌miRNAs的差异表达谱,对差异表达的miRNAs进行分析；通过TaqMan MicroRNA Assays进行实时荧光定量PCR验证microarray芯片结果；运用靶基因预测软件对甲状腺乳头状癌中显著差异的miR-146b-5p和miR-7进行靶基因预测,同时对所预测的靶基因进行分子生物学功能分析。结果1相对于癌旁组织,在甲状腺乳头状癌组织中筛选出38个表达上调的miRNAs,其中显著上调(log2≥1)的为：miR-146b-5p、miR-221、miR-222、miR-34a、miR-375、miR-31、miR-181a-2*、miR-21、miR-181c、miR-146b-3p、miR-181a、miR-1260b、miR-182、miR-1281、miR-22*；而表达下调的miRNAs有26个,其中显著下调(log2≤-1)的为：miR-7、miR-204、miR-486-5p、miR-335、miR-7-2*、miR-3149、miR-374b、miR-126、miR-130a、miR-99a、miR-150、miR-338-5p、miR-100、miR-3115 (p<0.05)。2为验证microarray芯片结果,我们挑选显著差异表达的miR-21和miR-181c进行实时荧光定量PCR,以RNU48作为内参基因,相对于癌旁组织,miR-21的上调倍数为3.81,miR-181c的上调倍数为1.34。3通过靶基因预测软件,miR-146b-5p筛选出80个靶基因,miR-7筛选出129个靶基因。4对靶基因分析后发现,许多靶基因参与了细胞增殖、细胞分化、细胞凋亡、细胞周期、信号转导通路及血管生成等,其中有些靶基囚参与了多个生物学过程。结论1初步建立起甲状腺乳头状癌的miRNAs表达谱,相对于癌旁组织,15个miRNAs在甲状腺乳头状癌中表达水平显著上调,14个miRNAs的表达水平显著下调,这些异常表达的miRNAs可能和甲状腺乳头状癌的发病密切相关。2实时荧光定量PCR与microarray芯片结果具有一致趋势,表明microarray芯片结果真实可靠。3靶基因预测结果显示,许多靶基因参与了一系列重要的生物学过程,提示上述异常表达的miRNAs可能通过其靶基因在甲状腺乳头状癌的发生发展过程中起着重要作用。