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肿瘤标志物对于肿瘤的早期诊断、疗效监控以及指导治疗具有重要意义,而实现对肿瘤标志物的灵敏、高效检测是发挥肿瘤标志物作用的关键所在。本论文主要围绕肿瘤标志物的化学发光免疫芯片的构建以及多种肿瘤标志物同时检测方面开展工作。具体研究内容如下:
(1)构建单一肿瘤标志物的化学发光免疫检测芯片,并实现对癌胚抗原(CEA)的定量检测。玻璃基片用酸预处理,使其充分暴露玻片表面的羟基,然后用γ-(甲基丙烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷(GPMS)进行硅烷化处理,得到环氧端基修饰的玻璃基质,该基质可与CEA抗体分子中赖氨酸残基上的活性氨基反应从而将CEA抗体分子固定在基片表面构建出CEA检测芯片;通过夹心免疫反应将待测CEA抗原以及碱性磷酸酶(ALP)酶标二抗结合到芯片表面,利用ALP酶对于发光底物的催化作用实现对CEA的定量检测。CEA的检测线性范围为0.5-120μg/L,线性相关系数R=0.9968。
(2)在上述单组分检测芯片基础上通过CEA抗体和糖抗原19-9(CA19-9)抗体的有序同时固定,构建用于胰腺癌两种标志物同时检测的化学发光免疫检测芯片,实现对两种模板蛋白的同时检测,CEA和CA19-9的检测限分别达到0.41μg/L以及0.36 kU/L。本文除了对芯片进行化学发光检测外,还进行了显色检测,为肿瘤标志物的定量检测提供了新的思路。