大容量肺灌洗对家兔肺泡上皮屏障和水通道蛋白1表达的影响

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目的:以家兔为研究对象,模拟临床大容量肺灌洗(whole lung lavage,WLL)方法对家兔进行肺灌洗,观察肺灌洗对肺泡上皮屏障和水通道蛋白1(AQP1)表达的影响,灌洗液中加入β2受体激动剂能否促进WLL术后肺泡内残留灌洗液的清除。方法:将15只家兔随机分为对照组、肺灌洗组、灌洗+β2受体激动剂组(β2受体组),每组5只。对照组:将家兔在全麻状态下行气管切开婴儿气管导管插管,分隔左右肺,右肺自主呼吸,左肺不做灌洗。肺灌洗组:模拟临床WLL方法将家兔在全麻状态下气管切开行气管导管插管,分隔左右肺,右肺自主呼吸,左肺用37℃生理盐水灌洗,每次灌入10mL/kg,每次灌注时间1~2分钟,引流2~3分钟,连续灌洗10次,灌洗液回收率在90%以上。β2受体组:WLL方法同肺灌洗组,但在灌洗液中加入浓度为0.05mg/kg β2受体激动剂特布它林,三组吸氧浓度均为21%。三组于灌洗前取股动脉血行血气分析,灌洗后10min再次取股动脉血行血气分析,放血处死家兔取肺灌洗侧组织行苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织形态学的改变,采用病理评分法评价各组家兔肺组织的病理改变;电子显微镜观察肺泡上皮屏障超微结构的改变;免疫组织化学染色(SP法)检测肺组织中AQP1蛋白的表达,以平均光密度值(OD值)表示AQP1相对表达量;实时荧光定量PCR法检测AQP1mRNA的表达,以SYBR-green I作荧光指示剂,检测AQP1mRNA的量,采用双ΔΔCt法计算各组目的基因的相对表达量。所得数据采用SPSS17.0软件进行统计学处理,各组计量资料采用均数±标准差(x±s)表示,组间差异显著性检验采用单因素方差分析和q检验,两组间比较采用SNK法检验,P<0.05为差异具有统计学意义。结果:(1)血气分析:灌洗前对照组(PaO266.20±3.12,氧合指数295.62±14.87)、肺灌洗组(PaO265.40±4.84,氧合指数311.43±23.06)、β2受体组(PaO269.10±12.43,氧合指数329.05±59.20) PaO2及氧合指数三组比较差异无统计学意义(P>0.05);大容量肺灌洗后10min家兔的动脉血气分析示:灌洗组(PaO248.98±4.01,氧合指数233.24±19.09)明显低于对照组(PaO259.22±2.70,氧合指数282.00±12.84),差异有统计学意义(P<0.05);β2受体组(PaO253.46±5.63,氧合指数254.57±26.83)也低于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。(2)肺组织湿/干重比(W/D):灌洗后肺组织的W/D灌洗组(3.62±0.14)和β2受体组(3.42±0.10)明显高于对照组(3.20±0.17),差异均有统计学意义(P均<0.05);但β2受体组W/D低于灌洗组,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)肺组织的大体表现:灌洗组和β2受体组家兔肺脏均有不同程度的肿胀,且下肺较明显,质量增加,切面可见淡红色泡沫样液体溢出;对照组肺组织弹性好,外观正常,无上述改变。(4)HE染色:对照组肺组织肺泡腔内未见水肿液,无肺泡受损及黏膜水肿改变;肺灌洗组和β2受体组家兔肺泡腔和肺间质内有淡红色的水肿液,肺泡腔扩大。病理评分:灌洗组(7.2±1.483)和β2受体组(5.2±1.095)高于对照组(0.8±0.837),差异有统计学意义(P<0.05);但β2受体组低于灌洗组,差异有统计学意义(P<0.05)。(5)电镜:对照组肺组织肺泡上皮细胞间结构完整,紧密连接未见破坏;肺灌洗组和β2受体组家兔肺组织肺泡上皮细胞间紧密连接有破坏。(6)免疫组织化学:对照组AQP1表达于支气管和肺泡周围的毛细血管内皮及肺泡上皮细胞,呈棕黄色染色提示AQP1表达阳性;灌洗组和β2受体组肺泡上皮细胞AQP1表达均较对照组增强,β2受体组表达增强更明显。肺灌洗组和β2受体组AQP1表达的OD值分别为(0.504±0.075)、(0.652±0.041),较对照组(0.354±0.014)明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);与肺灌洗组比较,β2受体组AQP1表达的OD值增高,差异有统计学意义(P<0.05)。(7)实时荧光定量PCR:灌洗组和β2受体组AQP1mRNA相对表达量分别为(3.07±0.75)、(4.74±1.14),明显高于对照组(1.90±1.09),差异具有统计学意义(P<0.05);与灌洗组比较,β2受体组AQP1mRNA相对表达量增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:(1)大容量肺灌洗后家兔存在一定程度的肺损伤。(2)大容量肺灌洗导致家兔肺组织AQP1表达增加。(3) β2受体激动剂能上调AQP1的表达,减轻肺泡上皮损伤,促进肺泡内残留灌洗液的转运,其上调AQP1的表达可能是其促进肺泡内液体转运的机制之一。
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