猪源蜡样芽孢杆菌的分离鉴定

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蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)对外界环境不良因子抵抗力强,分布范围广,不同菌株的致病性有很大差异,有些菌株作为益生菌已经广泛应用在畜牧、水产多种动物养殖过程中,有些菌株是条件致病菌,容易污染食物,引发食物中毒,是常见的食源性病原菌之一,还有些菌株能引起刺参的“腐皮综合症”、骆驼的“脓疱病”、牛的乳房炎等,但尚未见猪感染该菌的报道。本研究从湖南怀化某猪场采取腹泻耐过仔猪的肝脏样品,分离到一株细菌的纯培养物,经过生化试验、DNA检测、药敏试验和动物试验,确定为一株致病性蜡样芽孢杆菌。另外对来自湖南不同地区的5家猪场的猪粪和污水进行蜡样芽孢杆菌的初步分离调查,从所采样的猪场的污水和粪便中共分离出两株蜡样芽孢杆菌。实验结果表明,从腹泻耐过仔猪肝脏分离到的细菌为致病性蜡样芽孢杆菌新的菌株,命名为HN1203,该菌株的16SrDNA的序列已上传至GenBank,序列号为JX294967。药敏试验结果表明,分离到的3株蜡样芽孢杆菌都对头孢哌酮、阿莫西林、氨苄青霉素、青霉素G等耐药(R),对氯霉素、新霉素中敏(Ⅰ),对链霉素、庆大霉素、四环素、阿米卡星、恩诺沙星等敏感(S)。毒素基因试验结果表明,蜡样芽孢杆菌HN1203携带肠毒素基因(hbl、nhe和entFM)和细胞毒素K基因(cytK).多位点序列分型(MLST)显示,HN1203带有蜡样芽孢杆菌看家基因pta的新等位基因并命名为pta153,同时定义该菌株为新基因型ST611,16S rDNA序列与炭疽杆菌有些菌株一致。动物试验结果表明,HN1203能够致死实验小白鼠。本研究说明猪场环境中存在着致病性蜡样芽孢杆菌,应当引起重视,进一步监测猪源蜡样芽孢杆菌对环境以及食品的潜在危害,也警示着我们当选择该菌作为益生菌添加饲料时,一定要严格排查菌株的致病性。
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