论文部分内容阅读
MicroRNA(miRNA)是真核生物中位于非编码区的一类小RNA,他们在各种疾病和生理过程中起着非常重要的作用。其中miR-130a/b对白血病、脂肪生成等重要生理过程具有调控作用。然而,miR-130a/b的转录调控以及其在代谢和炎症方面的功能目前还远未研究清楚。本实验采用细胞转染、双荧光素酶报告系统、基因定点突变、染色质免疫共沉淀(ChIP)、荧光定量PCR、小鼠腹腔注射等实验技术,对miR-130a/b的转录调控机制进行了研究。我们发现C/EBPa可直接作用于miR-130a/b的启动子来调节其转录活性。取得的主要结果如下：1、克隆了小鼠miR-130a/b的启动子序列,并将它们构建于PGL3-Basic载体中。在BHK21细胞系中验证其启动子活性；2、通过荧光活性分析证实了C/EBPa对miR-130a的启动子活性具有显著的抑制作用,而对于miR-130b的启动子活性有显著性的上调；3、突变和ChIP实验确定了C/EBPa对miR-130a/b的关键作用位点和二者的直接相互结合；4、功能研究上,验证了miR-130a/b对3T3-L1细胞在成脂分化雌中的表达量显著下降,在稳转细胞中证实了miR-130a/b对TNFa和SP1的抑制作用。在活体研究中发现LPS处理导致niR-130a/b在腹腔巨噬细胞中的表达水平下降,并使附睾脂肪组织中miR-130b显著性上调。总之,本文证实了C/EBPa对miR-130a启动子活性的抑制作用和对miR-130b启动子活性的上调作用,并在细胞和活体水平上证明了miR-130a/b是参与代谢和炎症反应的重要因子。