泛素化是指泛素分子在一系列特殊酶作用下,将细胞内蛋白质分类,从中选出靶蛋白分子,并对靶蛋白进行特异性修饰的过程。泛素化是广泛存在于真核生物中的一种蛋白质翻译后修饰,在蛋白质定位、代谢、功能、调节和降解中起着十分重要的作用。同时,它也参与了包括细胞周期,免疫反应,转录,DNA修复,吞噬作用,自噬和病毒侵染等生命进程的调控。自噬是指细胞通过溶酶体来对异常的蛋白或细胞器进行降解的过程,是真核细胞维持内环境稳态的重要途径,同时也受到泛素化修饰的紧密调控。起初有研究表明,自噬是细胞的防御途径,能够有效降解病毒入侵所产生的异源蛋白。然而随着研究不断深入,发现病毒能够逃避宿主自噬途径的降解,甚至利用自噬途径产生的环境,更好的完成自身的复制增殖。家蚕核型多角体病毒（Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV）是一种大型双链DNA病毒,其引发的家蚕血液脓病是世界养蚕业面临的重大传染性疾病,同时核型多角体病毒也是一种重要的外源蛋白表达工具和潜在生物杀虫剂。BmNPV是不多的能够自身编码泛素基因的病毒,近期研究表明泛素化对于BmNPV的复制增殖具有重要影响,但是其具体分子机制及作用的靶标仍然未知。本研究将对BmNPV泛素基因泛素化靶标蛋白进行解析,从而增进对BmNPV与宿主相互作用机制的了解,主要研究结果如下:（1）利用λRed重组系统将野生型BmNPV T3株的BmBacmid的泛素基因缺失,构建出泛素缺失的杆粒BmT3DH10BΔubi-p MON7214。再通过Bac-to-Bac系统,将携带his/myc标签的病毒泛素基因回补到BmT3DH10BΔubi-p MON7214中,获得BmBacmidv Ubi-myc/his,转染BmN细胞,并经过两次扩增后得到滴度较高的重组病毒BmNPVv Ubi-myc/his。用此重组病毒感染BmN细胞,Western Blot检测表明构建的重组病毒能够表达带有his/myc标签的泛素。（2）利用构建的BmNPVv Ubi-myc/his重组病毒感染家蚕,获取重组病毒感染全蚕样本,裂解后利用镍柱在变性条件下纯化获得被病毒泛素修饰靶标蛋白。通过液相色谱-串联质谱法（liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS）鉴定,发现有176个家蚕宿主蛋白,54个BmNPV病毒蛋白被病毒泛素化。GO数据库分析表明,这些蛋白主要与细胞代谢进程、细胞进程、单一生物学进程、定位相关;细胞组成成分主要是细胞膜结构部分、细胞内部分、细胞器成分以及一些复合物成分;分子功能主要与细胞内结合功能、催化活性、转运活性、结构分子活性、抗氧化活性相关。KEGG分析表明病毒泛素调节的宿主蛋白主要与糖代谢,细胞运动,外源生物降解代谢,免疫系统,细胞骨架调节,线粒体自噬,细胞凋亡等密切相关。病毒自身被泛素化蛋白主要有病毒结构蛋白和与病毒DNA复制相关的蛋白。（3）用BmNPVv Ubi-myc/his重组病毒感染BmN细胞,通过myc单抗免疫共沉淀（co-immunoprecipitation,Co-IP）获得病毒泛素化蛋白及其互作蛋白,LC-MS/MS鉴定发现病毒多角体蛋白polyhedra,衣壳蛋白VP80,及家蚕的HSP/HSC蛋白等与选择性自噬相关的蛋白,高丰度得存在于BmNPV感染后的样品中,结合KEGG信号通路富集到与线粒体自噬相关,推测BmNPV侵染可能引起了宿主选择性自噬。（4）BmNPV感染BmN后能引起宿主自噬标志蛋白LC3从I型到II型的转变,以及p62蛋白的降解,表明BmNPV能引起宿主的自噬。在加入自噬特异性抑制剂Bafilomycin A1后,宿主自噬流受到抑制,自噬的抑制不影响BmNPV基因组的复制,但显著的降低了病毒多角体蛋白的表达和包涵体病毒的数量,表明宿主自噬途径可能被BmNPV劫持以利于多角体病毒的组装。