目的:本研究通过构建pGC-FU-LL37-GFP慢病毒表达载体,转染多能诱导干细胞,在实现目的基因LL37稳定表达的前提下,验证其在组织工程中的促血管生成作用,并诱导iPSCs细胞分化为尿路上皮细胞,达到在体外获取种子细胞的目的。方法:(1)目的基因LL37的提取;(2)pGC-FU-LL37-GFP慢病毒表达载体的构建及测序鉴定;(3)pGC-FU-LL37-GFP慢病毒表达载体对小鼠多能诱导干细胞的转染及鉴定;(4)通过细胞计数实验、细胞迁移实验、血管成形实验证实转染后的iPSCs细胞的促血管生成能力;(5)诱导染后的iPSCs细胞向尿路上皮细胞分化,并鉴定分化后的细胞。实验结果应用GraphPad Prism 8软件绘制统计结果图,应用IBM SPSS 25.0统计分析软件进行数据处理。结果:(1)qPCR结果证实慢病毒表达载体pGC-FU-LL37-GFP构建成功,并且测序结果与目标序列完全一致;(2)在转染后的iPSCs细胞内,目的基因LL37融合了GFP共同表达;(3)qPCR检测iPSCs细胞内目的基因LL37 m RNA表达量较对照组提高(P<0.01);(4)Elisa测定iPSCs细胞及细胞上清液,抗菌肽LL37的表达量较对照组提高(P<0.05);(5)细胞计数实验证明转染后的iPSCs细胞可促进HUVECs细胞增殖;(6)与对照组相比,实验组细胞划痕距离明显缩短(P<0.01),证明iPSCs细胞分泌的抗菌肽LL37可促进HUVECs细胞迁移;(7)与对照组相比,实验组血管腔分支点明显增多(P<0.01),证明转染后的iPSCs细胞上清液可加速HUVECs成管化进程;(8)分化后的iPSCs细胞形态呈铺路石样,具有明显的上皮样特性,qPCR及western blot鉴定分化后的iPSCs细胞,尿路上皮细胞标志物表达上调。结论:(1)iPSCs细胞转染pGC-FU-LL37后能够表达分泌抗菌肽LL37;(2)抗菌肽LL37转染iPSCs细胞能促进血管内皮细胞增殖、迁移以及血管生成;(3)抗菌肽LL37转染iPSCs细胞能够成功分化为尿路上皮细胞。意义:本研究为培养具有促血管生成作用的种子细胞提供了理论基础。