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目的：树突状细胞(Dendritic cell, DCs)是一种重要的抗原递呈细胞,在过敏性疾病例如哮喘中发挥着至关重要的作用。DCs递呈抗原给T辅助(Th)细胞,使Th0细胞倾向于Th2型分化。同时DCs可以分泌Th2型细胞因子,比如IL-4,IL-5和IL-13等,促进哮喘的病理学特征,如杯状细胞增生,气道重塑和气道高反应性等。因此,DCs不仅在触发哮喘炎症中发挥重要作用,对于维持和放大哮喘的气道炎症反应也具有至关重要的意义。但是,DCs在哮喘中的作用机制目前尚未完全清楚。钙池操纵的钙通道(Store-operated calcium entry, SOCE)是DCs钙离子内流的主要通道。通过组胺的不同受体,组胺可以刺激DCs倾向于DC2型分化,从而诱导T淋巴细胞在其Th11/2平衡中倾向于Th2型的免疫反应。同时组胺也可以诱导DCs从胞内钙池释放钙离子。因此,我们可以提出假设,组胺可能通过激活DCs上的SOCE,诱导钙离子从钙池的释放和钙内流,从而调节胞内钙信号,影响细胞的生理功能。本课题将对组胺是否能激活人DCs上的SOCE, SOCE是否在组胺诱导的DCs介导的Th2型免疫反应中发挥作用,以及组胺的哪些受体参与了这个过程进行探讨。方法：采集人外周静脉血,分离出单个核细胞后,CD14磁珠阳选出单核细胞,将其培养并诱导分化为树突状细胞。AlamarBlue还原法和台盼蓝细胞计数法同时用于检测各种试剂的细胞毒性。采用Fluo-3/AM荧光染料进行胞浆内钙离子荧光染色,然后用激光共聚焦系统观察胞内荧光强度实时变化,测定细胞内钙离子浓度变化情况。蛋白裂解液提取总蛋白,然后用Western-blotting方法检测STIM1和Orai1蛋白水平表达。TRIzol法提取细胞总RNA,采用逆转录荧光实时定量PCR方法检测STIM1和Orai1mRNA目对含量表达。流式细胞术用于检测DCs表面分子标志表达水平。Elisa法检测DCs分泌IL-10和IL-12p70的水平。DCs与同种异体来源的淋巴细胞进行混合淋巴细胞反应,流式细胞术检测CD3+CD8-淋巴细胞(即Th细胞)分泌的IL-4和IFN-γ的水平。结果：1)本实验主要试剂组胺,SOCE阻断剂SKF96365(SKF)、BTP-2,组胺4受体(H4R)拮抗剂JNJ7777120(JNJ),组胺1受体(H1R)拮抗剂pyridylethylamine (Pyr)在本文中所用浓度对细胞没有明显的毒性作用；2)组胺可以诱导明显的钙释放反应,细胞外液中加入外源性Ca2+之后,观察到显著的外钙内流。钙释放和钙内流反应均可以被SOCE阻断剂SKF-96365、BTP-2以及2-APB抑制；3)流式细胞技术结果提示组胺上调了树突状细胞CD86的表达,这种上调可以被SOCE特异性抑制剂BTP-2、H4R拮抗剂JNJ抑制。SKF和H1R拮抗剂Pyr可以抑制组胺刺激的DCs上CDla的表达；4)细胞外液中预孵育H4R阻断剂JNJ和H1R阻断剂Pyr后,对组胺刺激有明显钙释放反应的阳性DCs比例明显下降；5)Western blotting结果提示组胺可以上调DCs中SOCE两种最关键蛋白之一STIM1基因的蛋白表达,但是对Orai1蛋白的上调没有显著性差异。逆转录荧光实时定量PCR在mRNA水平上证实了与Western blotting同样的结果；6)组胺刺激可以上调成熟DCs分泌IL-10的水平,SOCE阻断剂SKF96365和BTP-2可以抑制组胺诱导这种上调。组胺抑制了成熟DCs分泌IL-12p70的水平,SOCE阻断剂SKF96365和BTP-2也可以抑制组胺或LPS诱导的成熟DCs IL-12p70的水平；7)在混合淋巴细胞反应(mixed lymphocytes responses, MLR)中,SOCE阻断剂SKF9636、BTP-2,H1R拮抗剂Pyr,H4R拮抗剂JNJ预孵育过的DCs与对照组相比,组胺刺激的DCs诱导的T辅助(T helper, Th)细胞向于Th2型分化的倾向降低。结论：组胺可以通过SOCE诱导钙释放和钙内流；组胺通过其H1和H4受体激活SOCE通道,促进DC的成熟和增强诱导其诱导T淋巴细胞向Th2型分化的能力；并且,SOCE阻断剂和H1/4受体拮抗剂单独或协同作用可以逆转组胺刺激的DCs诱导T淋巴细胞向Th2型分化的作用。结果为过敏性哮喘的机制研究提供了新的思路。