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目的根据Sekido法制备大鼠肺缺血-再灌注肺损伤动物模型,从分子及基因水平观察巨噬细胞源性MMP-9与TMIP-1在大鼠肺缺血-再灌注损伤早期的表达变化规律,探讨其发病机制中的作用,为缺血-再灌注早期肺损伤治疗提供一种新思路。方法1.本课题实验动物采用48只健康SD大鼠随机分为六组,每组8只。制备肺缺血-再灌注模型,肺缺血45min组、再灌注30min组、再灌注60min组、再灌注120min组、再灌注180min组,分别于缺血45min、再灌注30min、再灌注60min、再灌注120min、再灌注180min处死,留取左肺组织标本,另设空白对照组。2.用37℃生理盐水行支气管肺泡灌洗、离心,用含10%小牛血清的RPMI1640培养基培养沉淀细胞。应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测MMP-9和TIMP-1mRNA的表达,采用夹心酶联免疫法测定巨噬细胞源性MMP-9和TIMP-1蛋白表达量。并对所得结果进行统计学处理。1.与对照组相比,缺血45min组、再灌注30、60、120min、180min组MMP-9mRNA表达和蛋白浓度明显增加,有显著性差异(P<0.05),再灌注120min组mRNA表达和蛋白浓度达到最高峰。2.与对照组相比,缺血45min组、再灌注30、60、120min、180min组TIMP-1mRNA表达明显增加,有显著性差异(P<0.05),而蛋白浓度明显下降,有显著性差异(P<0.05)。3.与再灌注120min组相比,再灌注180min组MMP-9mRNA表达和蛋白浓度无明显增加;TIMP-1mRNA表达和蛋白浓度增加。结论1.在肺缺血-再灌注损伤早期,MMP-9表达升高,并随缺血-再灌注时间延长而增加,说明MMP-9是肺缺血再灌注损伤形成过程中重要的炎性因子;MMP-9/TIMP-1比值升高,并随缺血-再灌注时间延长而增加,两者比值失衡是产生缺血-再灌注相关性肺损伤病理生理变化的一个重要原因,在一定程度上可以反映体内的两者动态平衡状况和肺损伤的程度。2.与再灌注120min组相比,缺血再灌注180min时MMP-9表达无明显增加,TIMP-1表达明显增加,提示MMP-9对肺损伤作用主要在肺缺血-再灌注早期,应尽早干预,恢复MMP-9/TIMP-1平衡,以减轻炎症反应。