研究背景乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)属于嗜肝DNA病毒。HBV可以引起肝脏的急、慢性感染,并可能发展为肝硬化、肝细胞性肝癌。据世界卫生组织报道,全球大约有20多亿人感染过乙肝病毒,其中3.5亿以上为慢性乙型肝炎病毒感染者。每年全世界范围内约有一百万人死于慢性乙型肝炎病毒感染所致的肝硬化、肝细胞肝癌和肝衰竭。我国是乙型肝炎高发流行区,据估计我国有近60%的人群感染过乙型肝炎病毒,乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阳性者占全国人口的8%～15%,最高省达16.79%,远远高于世界平均水平约5%,慢性感染者占全世界慢性HBV感染人数的1/3。自从乙型肝炎病毒表面抗原被Blumberg等发现,到乙肝病毒全基因组的克隆和测序完成,人们对HBV的基因组成、生物学特性以及其生命周期的认识得到了迅速发展。尽管人们对HBV及其所致疾病有了相当深入的认识,但是病毒生命周期的早期阶段仍然不是很清楚,最主要的原因就是缺乏合适的动物模型及体外细胞培养系统。本课题组已成功建立了HepG2与人原代肝细胞的融合细胞模型,命名为HepCHLine-4[15].HepCHLine-4细胞既具有人原代肝细胞对HBV的易感性同时也具有HepG2细胞能在体外传代培养的特性,克服了人原代肝细胞以及HepG2细胞单独作为HBV感染细胞模型的缺陷。HepCHLine-4能够被HBV自然感染,并能在感染后启动有效的病毒复制,形成复制中间产物HBVcccDNA,合成HBV特异性抗原并能合成子代病毒颗粒分泌出细胞,但是感染率较低。本研究旨在通过在培养基中添加化学物质来增加HepCHLine-4对HBV的感染力,使该杂交细胞株HepCHLine-4可以更好的作为适宜于HBV自然感染的细胞模型。目的评价二甲基亚砜(DMSO)、地塞米松对于乙型肝炎病毒(HBV)感染HepCHLine-4细胞能力的影响。方法HBV感染前将HepCHLine-4细胞分为DMSO处理组(A组)、地塞米松处理组(B组)、DMSO及地塞米松处理组(C组)和对照组(D组)。含胎牛血清100mL/L的细胞培养基中A组添加20mL/L DMSO,B组添加5xlO-5mol/L地塞米松,C组添加20mL/L DMSO及5xlO-5mol/L地塞米松,D组不添加上述两种试剂。用相应培养基培养各组细胞4d以备病毒感染。将HBV病毒颗粒加入各组细胞中于37℃、50mL/LCO2的培养箱中孵育24h。电化学发光法检测感染后各组细胞培养上清中HBsAg和HBeAg的滴度；荧光定量PCR检测感染后各组细胞培养上清的HBV DNA。间接免疫荧光检测感染后各组细胞内HBcAg的表达。结果DMSO处理组HBsAg和HBeAg的滴度相对较高；地塞米松处理组HBVDNA值相对较高；DMSO及地塞米松处理组HBsAg和HBeAg的滴度及HBVDNA值均较高,其最高值分别是125.790IU/mL,4.784S/Co,5.930x105copies/mL;对照组HBsAg和HBeAg的滴度及HBV DNA值均较低,其最高值分别是85.490IU/mL,1.896S/Co,3.729x104copies/mL。四组细胞胞浆及部分胞核内HBcAg都是阳性表达,但是DMSO及地塞米松处理组间接免疫荧光染色弥漫性着色更明显。结论DMSO.地塞米松有提高HepCHLine-4细胞被HBV自然感染能力的趋势。