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目的本课题旨在研究miR-362-5p对胃癌细胞耐药性影响及其机制方法通过miRNA微阵列检测法在人类顺铂敏感的胃癌细胞系SGC7901和相应的顺铂(DDP)耐药细胞系SGC7901/DDP之间分析出miRNA差异表达谱。采用实时定量荧光PCR(real time-PCR,RT-PCR)方法验证miR-362-5p的表达差异。通过重组慢病毒载体转染法构建稳定过表达、敲低miR-362-5p的细胞系。通过CCK-8法检测细胞存活率。通过流式细胞术测定细胞凋亡率。通过数据库micro RNA.org和miRDB寻找miR-362-5p在胃癌中可能作用的靶点。利用si RNA敲除细胞中SUZ12的表达。Western blotting用于检测细胞中SUZ12、NF-k B/p65、caspase-3、和cleaved-PARP蛋白的表达水平。结果miRNA微阵列结果显示,与SGC7901细胞相比,miR-362-5p在SGC7901/DDP细胞中的表达水平降低。并且,RT-PCR也证实了miR-362-5p在SGC7901/DDP细胞的表达低于SGC7901细胞。慢病毒过表达载体miR-362-5p-mimic转染的SGC7901/DDP细胞(SGC7901/DDP-miR-362-5p-OE)中miR-362-5p的表达水平显著高于载体miR-362-5p-control转染的SGC7901/DDP细胞(SGC7901/DDP-miR-362-5p-NC)和SGC7901/DDP细胞。顺铂处理各组细胞48小时。结果显示SGC7901/DDP-miR-362-5p-OE细胞的半数致死率明显低于SGC7901/DDP-miR-362-5p-NC细胞和SGC7901/DDP细胞(IC50,1.609±0.332 VS.5.133±0.569,5.161±0.641μg/m L,P<0.01)。同样,慢病毒敲低载体miR-362-5p-inhibitor转染的SGC7901细胞(SGC7901-miR-362-5p-KD)中miR-362-5p的表达水平显著低于载体miR-362-5p-control转染的SGC7901细胞(SGC7901-miR-362-5p-NC)和SGC7901细胞。SGC7901-miR-362-5p-KD细胞的顺铂半数致死率显著高于SGC7901-miR-362-5p-NC细胞和SGC7901细胞(IC50,0.676±0.042 vs.0.286±0.025,0.300±0.009μg/m L,P<0.01)。此外,miR-362-5p的上调显著增加了顺铂诱导的凋亡,而miR-362-5p的下调则减弱了顺铂诱导的凋亡。数据库预测显示SUZ12可能是miR-362-5p的靶点。SGC7901/DDP细胞中SUZ12蛋白和m RNA的表达水平显著高于SGC7901细胞。利用SUZ12-si RNA敲低SGC7901/DDP中SUZ12的蛋白表达量。结果显示SGC7901/DDP-SUZ12-si RNA细胞顺铂半数致死率低于SGC7901/DDP-control细胞(IC50,2.569±0.479和5.097±0.629μg/m L,P<0.01)。并且,在SGC7901/DDP细胞中敲低SUZ12表达能降低细胞NF-k B/p65蛋白水平。更重要的是,SGC7901/DDP细胞中miR-362-5p的上调能明显降低SUZ12的表达水平,而miR-362-5p的下调则增加了SUZ12的表达水平。结论miR-362-5p通过调节SUZ12的表达来逆转胃癌细胞顺铂的耐药性