【摘 要】
：
脂筏是细胞膜上脂质高度有序的膜结构域(<200 nm),其富含胆固醇和鞘脂类物质。脂筏选择性地招募特定类型的脂质和蛋白,从而与多种生理功能如免疫信号传导、宿主-病原体相互作用、癌症的发生与发展和心血管疾病等密切相关。因此,实现脂筏原位成像和长时间跟踪有助于进一步加深对脂筏选择性招募机制及其生理功能的理解。目前的脂筏成像技术主要依赖于荧光成像,但这些方法都是将荧光分子标记在特异性识别脂筏的探针
论文部分内容阅读
脂筏是细胞膜上脂质高度有序的膜结构域(<200 nm),其富含胆固醇和鞘脂类物质。脂筏选择性地招募特定类型的脂质和蛋白,从而与多种生理功能如免疫信号传导、宿主-病原体相互作用、癌症的发生与发展和心血管疾病等密切相关。因此,实现脂筏原位成像和长时间跟踪有助于进一步加深对脂筏选择性招募机制及其生理功能的理解。目前的脂筏成像技术主要依赖于荧光成像,但这些方法都是将荧光分子标记在特异性识别脂筏的探针上,而不能对脂筏中分子进行直接标记,因此不适用于动态跟踪脂筏组分。并且,这些识别探针或脂质荧光探针会迅速进入细胞内,因此导致可疑的结果。所以,发展能直接标记和长时间跟踪脂筏分子的方法对于脂筏的研究具有重要意义。受到脂筏中有多种糖复合物如糖蛋白和糖脂这一特点的启发,本文以MCF-7细胞膜的脂筏作为研究模型,设计了一种利用脂筏聚糖(与蛋白质或脂质共价连接的碳水化合物链)作为标记和成像位点的邻近酶催化糖重构策略。该方法将脂筏识别、聚糖重构酶抑制-激活转换和邻近糖重构相结合,并利用生物正交标记技术,实现了脂筏区域的直接化学标记。以金纳米粒子(Au NP)作为负载单元,集成脂筏识别分子霍乱毒素B亚基(CTx B)和聚糖重构分子半乳糖氧化酶(GO)构建了探针GO-Au NP-CTx B。通过CTx B与单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)之间的结合,将被亚铁氰化钾抑制了GO活性的探针特异地导向到脂筏区域,洗去未结合的探针后,加入铁氰化钾重激活GO活性,此时探针对邻近区域执行聚糖重构操作—氧化糖链末端的半乳糖/N-乙酰半乳糖胺,然后利用酰肼-FITC或酰肼-AF647在苯胺催化下进行生物正交标记,最后通过共聚焦显微镜进行成像。由于探针尺寸相对于脂筏较小,且严格分离了探针锚定和重构事件,从而成功实现了限域于脂筏的直接标记。通过利用Au NP较强的负载能力、GO的循环氧化能力和脂筏区域糖复合物的高表达,本方法成功将一次脂筏识别事件转换为多次限域于脂筏的标记操作,实现了对脂筏区域组分的高效直接标记和成像。该方法不仅可以提高脂筏成像的灵敏度,而且可以对脂筏组分进行原位的长时间跟踪。邻近酶催化糖重构技术为脂筏成像提供了一个新视角,当与其他技术(如质谱)结合使用时,可以进一步用于GM1周围糖蛋白/糖脂的共定位分析以及亲脂筏成分的分析,并将有助于揭示脂筏区域的分选机制和生物学功能。
其他文献
随着互联网的普及和人们网络知识的日益增长,电子商务蓬勃发展,与人们的生活越来越密不可分,越来越多的人从观望者变成了消费者、参与者。在这样的大背景下,基于B2C的电子商务由于其快捷方便的网上购物环境、安全稳定的支付方式及成熟的物流配送体系等特点处于稳步发展的过程中。随之而来的,是B2C电子商务中的信用问题。相较于传统商务模式,电子商务本身具备一定的虚拟性,其交易的跨时间、跨空间特性,都使得消费者和企
我国海域广阔、河流众多、航运发达。在周边海域监控、内河港口船舶信息管理、环境感知决策等领域中,海上目标检测与跟踪的理论研究与实际应用具有重大意义。目前,主要通过合成孔径雷达成像、遥感成像、红外成像及可见光成像对来检测海上目标。其中可见光成像与其它成像方法相比,其包含丰富的颜色、纹理及光谱信息,可实现小范围海域多目标船舶高效检测与跟踪。其价格低廉适于大规模推广应用,已成为当前的研究热点。本文以海上目
2016年5月1日,我国全面“营改增”的时代到来了,建筑业、房地产业、金融业、生活服务业四大行业成为了最后一批纳入增值税范围的行业。北京TL建筑公司作为本次税制改革的一员,企业税负控制受到了重大挑战,公司自2016年“营改增”之后连续3年税负都在8%左右,税负翻倍增长,严重影响企业的发展。如何降低税负,是北京TL建筑公司迫切需要解决的问题。本文以北京TL建筑公司为研究对象,首先对研究的背景、国内外
在坡体滑移中水是其主要影响因素,因此在边坡治理中,对水的疏排就显得格外重要。在工程治理中可利用地下水渗流数值模拟的相关软件来对坡体治理中水的疏排进行模拟分析,以期能了解坡体中地下水的渗流场变化与治理工程的排水效果。本文在基于四川省阿坝州茂县富顺乡团结村岷江电化有限公司厂区西面边坡的勘察报告、现场测量、理论分析、经验取值、试验数据的基础上。借用Modflow软件为研究工具,以试验方法为手段,从数值模
电力是当今最常用的能源之一,在大多数领域得到了广泛的应用。其在发电、输电、配电、用电各个环节通过电能计量装置对电能进行计算,但由于大量的电力电子元件的接入,使得谐波问题严重,而谐波也会产生电能,就会对电能计量受到影响,因而对电能的准确计量就显得尤为重要。本文针对电力系统的谐波问题,对其进行分析。首先通过大量的阅读国内外文献。了解了电子式电能表的工作原理和电能的计量方法,在此基础上,提出了一种改进的
地理标志被认为是对原产地产品质量的认证,它作为集体证明商标,受法律保护。农产品质量具有典型的内隐性,农产品想要品牌化发展,申请地理标志是十分有效的途径,基于此,地方政
随着城镇化进程的加快,城市的人口快速增长,各种公共场所活动日益增多,这些场所具有人群流动性大、高度聚集等特征。若活动期间,公共场所发生不确定的突发事件,例如人员摔倒、火灾等情况,容易造成人群拥挤,给人群快速疏散带来安全隐患。研究公共场所的人群密度图中的人群密度特征,确定高密度人群位置,设计人群安全疏散路线,对于人群快速疏散,保障生命安全具有重要意义。针对如何更精确地获取图片中不同远近的人群密度图,
《焦点访谈》自创办以来,其对自己的定位就是舆论监督。它通过报道一些社会热点问题,揭露其出现的原因,并提出解决方法,受到了人们的欢迎。但是《焦点访谈》栏目在发展过程出现了一些问题,如舆论监督内容重复性高,硬监督比重越来越少,舆论监督内容公共性不足,舆论监督热点事件与社会热点事件相差甚远等等。这都值得我们去进行深入的探究。本文先对十八大以来《焦点访谈》栏目进行深刻分析,然后对十八大以来《焦点访谈》所面
随着电力合作在“一带一路”沿线国家的不断升温,电力工业已成为能源行业拓展业务的重要区域。为了保证电力能源供应的连续和稳定,实现电力调度精确化和运营安全经济化,针对电力负荷预测精度不高的问题,本文运用混沌动力学理论,分析了一种具有隐藏吸引子结构的三维jerk混沌系统,并运用混沌时间序列分析理论以及径向基函数(Radial Basis Function,RBF)神经网络预测理论提出了一种混沌时间序列的
运输是雏鸡破壳后经孵化场到养殖场的必经环节,运输应激会对雏鸡的生长及生产性能产生极大的影响,造成畜禽养殖业的损失。肝脏作为体内主要的代谢器官,在运输应激中的反应较为明显。热休克蛋白可以在应激过程快速反应,起到保护作用。黄芪多糖(APS)是黄芪的提取物,有抗应激作用,但是其拮抗运输应激致雏鸡肝脏损伤,尤其是热休克蛋白反应的效果和机制尚不明确。本研究以雏鸡为实验对象,采用模拟运输的方法,用APS滴口预