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白三叶(Trifolium repens L.)是豆科多年生草本植物,是一种营养丰富的牧草,产量高,在世界上分布很广。常用于饲喂家畜和建植草坪,也可全株入药,具有清热,宁心,凉血等功效。多糖广泛存在于生物体中,是一种天然生物大分子,具有多种生物活性,如抗肿瘤、抗氧化、降血糖、降血脂等。本试验以白三叶为原料,对白三叶多糖(Polysaccharides from Trifolium Repens L.,TRPs)进行提取,确定了TRPs最合适的提取条件,同时将粗多糖进行分离纯化,对纯化后的多糖进行了初级结构分析,试验结果如下:(1)利用热水提取法(HWE)、超声波辅助提取法(UAE)、酶提取法(EAE)、酶-超声波辅助提取法(UEAE)四种提取方法对TRPs进行提取,分别得到HWE-TRPs、UAE-TRPs、EAE-TRPs、UEAE-TRPs四种多糖,比较其对多糖得率、理化性质、抗氧化活性和降血糖活性的影响。结果表明:EAE-TRPs和UEAE-TRPs的得率显著高于UAE-TRPs和HWE-TRPs(P<0.05);EAE-TRPs的糖醛酸含量较高,分子量较小,具有较强的抗氧化活性和显著的α-葡萄糖苷酶抑制活性。(2)根据上述结果选用EAE提取TRPs,对其提取条件进行响应面优化。先进行单因素试验,再通过响应面优化提取条件,最终确定最佳提取工艺为:料液比为30 mL/g,酶解时间87 min,酶复合物添加量1.6%,pH为6,此条件下的TRPs得率为13.15±0.12%。(3)采用3种方式干燥TRPs,分别为热风干燥(HD)、冷冻干燥(FD)、真空干燥(VD),得到HD-TRPs、FD-TRPs、VD-TRPs三种多糖,研究不同干燥方式对其得率、理化性质和活性的影响。结果显示:干燥方式对多糖得率有显著影响(P<0.05),FD-TRPs得率最高;FD-TRPs的总糖含量和糖醛酸含量显著高于VD-TRPs和HD-TRPs(P<0.05);FD-TRPs的分子量较小,抗氧化活性较高,对α-葡萄糖苷酶有较强的抑制活性。因此,FD为干燥TRPs较合适的方式。(4)白三叶粗多糖经DEAE-52纤维素离子交换柱层析和Sepharose CL-6B凝胶柱层析,得到了纯化多糖TRPs-1.2。对TRPs-1.2的结构进行了初步研究,从分子量分布结果看,TRPs-1.2为均一级分,分子量为4387.58 Da。采用HPLC检测TRPs-1.2单糖组成,其由半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖组成,摩尔比为1.00∶10.77∶4.41∶4.09。紫外光谱检测结果发现TRPs-1.2不含核酸和蛋白质。红外光谱检测结果显示TRPs-1.2有典型的多糖吸收峰。本研究开发了白三叶新的利用领域,未来可以在此基础上进行更深入的研究,将白三叶多糖应用到食品开发、饲料添加等领域。