青风藤果实色素的纯化与性质分析

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青风藤是一种功效显著的中药材,其果实形似蓝莓,色泽为紫红或者紫黑色,果汁为紫红色,人工栽培青风藤,其果实亩产约为400kg/亩,具有很高的开发价值。本文以秦岭采摘的青风藤果实为原料,通过压榨法对其果汁进行提取,得到色素粗提液;对粗提液进行分析,选取其中花色苷成分进行纯化,并对花色苷进行性质分析,试验结果表明:(1)通过醋酸铅反应验证色素粗提液中含有酚基;通过氯化铁反应验证了色素粗提液中含有酚羟基;硫酸-蒽酮法测得总糖含量为0.212mg/m L,Na NO2-Al(NO2)3比色法测得总黄酮的含量为0.142mg/m L,福林酚法测得总多酚含量为0.052mg/m L,p H示差法测得总花色苷含量为0.145mg/m L,通过UV-Vis分析得出其中花色苷的最大吸收波长为517nm,发生3-O取代,酰基个数大于1;通过LC-MS,比对TCM库,匹配到多种花色苷类、生物碱类、黄酮类物质,其中响应值最高的是芍药花色素、飞燕草素-3-O-葡萄糖苷、山柰酚-3-O-芸香糖苷、3-羟基黄酮,这4种物质均具有抗氧化性。(2)选用大孔树脂吸附法对粗提液中的花色苷类物质进行初步纯化,制备色素纯化液,试验表明,最优纯化工艺为:选取XDA-8大孔树脂,样品浓度A=2.568,流速=30m L/h,p H=3.0;选取乙醇作为洗脱剂,浓度=90%,流速=40m L/h,p H=3.0,纯化后的花色苷的含量由0.145mg/m L提升到0.469mg/m L。(3)选用喷雾干燥法对色素纯化液进行干燥,制备青风藤花色苷粉末,根据单因素实验设计响应面优化实验得到喷雾干燥的最优干燥条件为:进风温度173℃、进样量21ml/min、可溶性固形物含量为10.5%、结合β-环状糊精含量对产率影响的试验,助干剂的最佳添加量为可溶性固形物含量的8%,最优条件下,产率为35.8%。(4)探究了青风藤花色苷粉末在不同条件下的稳定性,单因素试验表明,青风藤花色苷在常温条件下较为稳定,高温条件下易分解;自然光条件下稳定,紫外光条件下易分解;大部分金属离子不影响其发色,但Fe3+会使其变为黄褐色,K+、Al3+会使其变为紫红色。(5)色素粉末体内和体外抗氧化活性试验表明,青风藤花色苷在清除羟自由基、DPPH自由基、超氧阴离子自由基方面表现出了很强的能力;FRAP试验表明,相比其他原料的色素提取物,青风藤花色苷的抗氧化能力最强。青风藤花色苷对肝癌细胞株的抗氧化活性试验表明,添加有样品溶液保护细胞几乎没有受到强氧化剂H2O2溶液的干扰,证明青风藤花色苷具有强抗氧化性。
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