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背景在全世界范围内,肺癌（lung cancer,LC）的发病率仍然在持续上升,肺癌已经是全球发病率最高、死亡人数最多的恶性肿瘤,目前主要的治疗方式包括手术、化疗和放疗。近年来,嵌合性抗原受体（chimeric antigen receptor,CAR）T淋巴细胞（CAR-T细胞）疗法作为一种新的免疫治疗方法,已经在血液系统恶性肿瘤的治疗中取得了可喜的研究成果,CAR-T细胞治疗应用于实体瘤的研究也越来越多。MUC1是一种大分子量（>200k D）的跨膜糖蛋白,其表位可被抗体识别,同时也可以作为超抗原和T细胞受体蛋白多价结合,进而活化T细胞。这种肽链表位表达在正常细胞中时,被MUC1蛋白的外周糖链所掩盖,所以不能被识别;但在癌变的细胞表面表达时,糖基转移酶活性的升高进而导致不完全糖基化,不完全糖基化又会造成侧链变短及核心肽的暴露,因而表现出异常的糖链表位和肽抗原表位,成为免疫治疗的靶点。MUC1在包括肺癌的多种上皮细胞来源的肿瘤中过表达,现在,MUC1已经成为细胞免疫治疗的热门靶标之一。已有动物实验研究证明,针对MUC1设计的CAR-T治疗非小细胞肺癌的有效性。细胞程序性死亡受体-1（programmed cell death protein 1,PD-1）,也被称作B7-H1或CD274,是与PD-L1（programmed cell death 1 ligand,程序性死亡受体-配体1）相对应的配体,在激活的B细胞、T细胞、巨噬细胞、树突状细胞及肿瘤细胞表面普遍表达。PD-1/PD-L1信号通路的启动致使形成肿瘤免疫抑制性微环境,使肿瘤细胞能够逃避机体免疫系统的监察和攻击,是引起肿瘤免疫逃逸的主要机制之一。已有研究指出,阻断PD-1/PD-L1能够提高T细胞介导的细胞毒性,提高其杀伤效果。PD-1也成为了近几年免疫治疗研究中最为热门的免疫检查点之一。我们开展了靶向MUC1联合PD-1敲除的CAR-T细胞治疗非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）的研究,有望在抵抗免疫抑制微环境的同时,增强靶向MUC1 CAR-T细胞治疗的效果,为非小细胞肺癌的治疗提供新的方向。方法1、使用通用生物合成CAR序列,慢病毒感染T细胞,将Cas RNP以电穿孔的方式导入到CAR-T细胞中,随后进行PD-1基因敲除。2、采用流式细胞术检测CAR-T细胞阳性率、PD-1基因敲除效率。3、采用流式细胞术检测靶向MUC1联合PD-1敲除的CAR-T细胞和普通T细胞对肿瘤细胞的攻击能力。4、免疫组化法检测患者入组前肿瘤组织中MUC1的表达。5、对入组的10名晚期非小细胞肺癌患者以剂量爬坡的方式进行CAR-T细胞治疗。6、仔细观察并记录受试者淋巴细胞清除、细胞回输过程中及之后的副反应,分析靶向MUC1联合PD-1敲除的CAR-T细胞用于晚期非小细胞肺癌患者治疗的安全性。7、使用影像学检查及血清肿瘤指标检查评估CAR-T细胞治疗晚期非小细胞肺癌的有效性。8、采用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）检测受试者细胞回输后外周血中CAR-T DNA的拷贝数。结果:1、成功制备了靶向MUC1联合PD-1敲除的CAR-T细胞。2、采用流式细胞术能稳定检测出CAR-T细胞阳性率、PD-1基因敲除效率。3、靶向MUC1联合PD-1敲除的CAR-T细胞较普通T细胞对肿瘤细胞的杀伤作用更强。4、所有受试者在接受CAR-T细胞治疗后均没有出现严重的不良反应,这表明靶向MUC1联合PD-1敲除的CAR-T细胞用于非小细胞肺癌治疗的安全性。5、部分病人（4/10）在CAR-T细胞治疗后病情得到控制,证明了靶向MUC1联合PD-1敲除的CAR-T细胞治疗在晚期非小细胞肺癌中的有效性。6、部分患者细胞回输后CAR-T细胞能在体内存活一段时间并有扩增。结论:靶向MUC1联合PD-1敲除的CAR-T细胞用于晚期非小细胞肺癌的治疗是安全且有效的。