猪卵泡液抑制素的粗提、鉴定和抑制素α亚基在大鼠中枢神经的免疫组化定位

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一、猪卵泡液粗提物抑制素生物活性的测定 用处理过的猪卵泡液经SephadexG—200和SephadexG—100二次凝胶过滤层析后,测定各组份对HCG诱导的小白鼠生殖器官发育及输卵管水肿抑制的影响。实验结果:猪卵泡液经二次凝胶过滤层析后的峰1对HCG诱导的小白鼠的卵巢增重、整个生殖器官增重以及输卵管水肿有明显的抑制作用。结果表明,峰1中含有生物活性较高的抑制素蛋白组分。 二、免疫印迹法检测猪卵泡液抑制素 选用猪卵泡液、猪卵泡液经过经SephadexG—200和SephadexG—100二次凝胶过滤层析后所得到两个峰,先进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),然后以抑制素α亚基的单克隆抗体为一抗进行免疫印迹(Western Blot)。实验结果表明,在第二(猪卵泡液)、第三(峰1)泳道的18KD部位均出现棕色阳性反应条带,说明在猪卵泡液和所得的第一个峰中均含有抑制素α亚基。 三、抑制素α亚基在大鼠下丘脑、垂体的免疫组化定位 为研究抑制素通过血脑屏障的机理,对正常性成熟雌性大鼠以及去卵巢不注射和注射抑制素α片段、注射抑制素粗提物的大鼠下丘脑、垂体进行抑制素α亚基的免疫组化定位,结果显示,在正常性成熟雌性大鼠的下丘脑、垂体均出现棕色的阳性部位;去除卵巢后10天的大鼠下丘脑、垂体没有出现阳性反应部位;对于去除卵巢并注射抑制素α片段的大鼠,注射0.1μg后的各时间段在下丘脑、垂体没有发现阳性部位;注射0.2μg后4小时在下丘脑出现阳性部位,而在垂体没有发现;注射0.5μg后2小时就下丘脑、垂体发现阳性部位;注射抑制素粗提物0.2ml后4小时在下丘脑、垂体也出现了阳性反应部位。试验表明,正常大鼠下丘脑、垂体均存在着抑制素α亚基的结合位点;卵巢是抑制素的主要产生部位;对于注射的抑制素α片段、抑制素粗提物,均能到达其下丘脑、垂体,并存在剂量与时间上的关系,抑制素α亚基可以通过血脑柳伟荣:猪卵泡液抑制素的粗提、鉴定和抑制素。亚基在大鼠中枢神经的免疫组化定位屏障而到达神经中枢.
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