沙丁胺醇、已烯雌酚、双酚A、甲醛、苯乙烯、苯并(a)芘、多氯联苯、邻苯二甲酸酯、尼古丁等15种环境污染物因为广泛的使用,对人体产生严重危害,已经引起人们的高度关注。对这一系列人们极易接触到的污染物进行人体内暴露含量的检测,不仅能够真实客观地反映个体污染物质的暴露水平,而且可以避免个体差异的影响,直接显示个体受到各种环境污染物质的综合危害程度。但目前内暴露检测主要只是针对一种或一类性质相近指标进行检测,而要检测多种类型环境污染物内暴露剂量,全面系统评价环境污染物对人的危害程度,存在着技术瓶颈,即:检测污染物指标众多、所测物质不是原型而是代谢产物、含量低、检测指标性质各不相同导致样本前处理难统一等一系列问题,造成检测服务项目难以推广。因此,基于内暴露的多种类型的环境污染物检测技术亟待研究。本研究目标在于建立一种能够同时检测尽可能多的常见环境污染物质及其代谢产物的方法。通过参考文献,根据检测指标是否需要衍生化,前处理条件和色谱条件能否统一来尽可能同时检测污染物指标。本研究采用先通过方便、快捷、高通量的ELISA方法初筛,再色谱方法精确定量检测的一套集成检测技术体系方案。主要对常见污染物人体内暴露的精确定量检测技术进行了研究,并初步考察了ELISA初筛方法的可行性。重点研究怎样尽可能的统一前处理条件和色谱条件,利用气相色谱—质谱联用(GC/MS)对多项污染物指标进行同时检测,同时也不排除用HPLC等方法辅助检测。实现建立基于内暴露的多种类型环境污染物方便、快捷、大通量检测技术,直接综合的评价人类健康状态的目标。1、GC/MS同时检测苯乙烯和尼古丁含量方法的建立目的:建立一种同时检测人尿样中可的宁(COT)、苯乙醛酸(PA)和苯乙醇酸(MA)含量的GC/MS分析方法。方法:采用GC/MS法,EI检测器,色谱柱为DB-5MS毛细管柱。进样前尿样先经过氯仿萃取,吹干后用MSTFA衍生化。结果:COT在0.0002～3.5μg/mL呈线性关系,PA和MA在1.25～160μg/mL呈线性关系,定量限分别为0.0002μg/mL、1.25μg/mL和1.25μg/mL,方法回收率分别为89.5%～102.4%、84.9%～91.4%和83.5%～113.6%。本实验室建立的方法成功测定了120例正常人尿样中PA、MA和COT的含量。结论:本研究建立的方法最低检测限与已报道的单个污染物检测方法相当,可用于同时监控和测定尼古丁和苯乙烯对人体的危害。2、GC/MS同时检测雌激素类似物和沙丁胺醇含量方法的建立目的:建立一种同时检测人尿样中双酚A(BPA)、己烯雌酚(DES)和沙丁胺醇(SAL)含量的GC/MS分析方法。方法:采用GC/MS法,EI检测器,色谱柱为DB-5MS毛细管柱。进样前尿样分别经过cleanert PCX和cleanert PEP固相萃取,吹干后衍生化。结果:BPA在1～200ng/mL呈线性关系,DES在2～300ng/mL呈线性关系,SAL在0.01～1.2μg/mL呈线性关系,定量限分别为1ng/mL、2ng/mL和10ng/mL,方法回收率分别为84.7%～104.9%、87.0%～105.4%和81.8%～96.8%。本实验室建立的方法成功测定了100例正常人尿样中BPA、DES和SAL的含量。结论:本实验室建立的方法定量限与已报道的单个污染物检测方法相当,可用于同时监控和测定β-E2、BPA、DES和SAL对人体的危害。3、GC/MS同时检测三甲基氯化锡和盐酸氯丙嗪含量方法的建立目的:建立一种同时检测人尿样中三甲基氯化锡和盐酸氯丙嗪含量的GC/MS分析方法。方法:采用GC/MS法,EI检测器,色谱柱为DB-5MS毛细管柱。尿样先经过乙酸乙酯萃取,浓缩后进样分析。结果:三甲基氯化锡在0.05～5μg/mL呈线性关系,盐酸氯丙嗪在0.01～1μg/mL呈线性关系,定量限分别为0.05μg/mL和0.01μg/mL,方法回收率分别为87.0%～99.4%和85.9%～105.5%。本实验室建立的方法成功测定了85例正常人尿样中三甲基氯化锡和盐酸氯丙嗪的含量。结论:本实验室建立的方法定量限与已报道的单个污染物检测方法相当,可用于同时监控和测定三甲基氯化锡和盐酸氯丙嗪对人体的危害。4、其他污染物检测方法目的:确定其他7种常见污染物(苯并芘、二恶英、多氯联苯、邻苯二甲酸二丁酯、有机磷、甲苯、甲醛)的检测方法。方法:通过参照文献报道,本研究采用HPLC法分别检测尿液中苯并芘及二恶英代谢产物4,5-二氯邻苯二酚的含量,GC/MS法分别检测尿样中多氯联苯、邻苯二甲酸二丁酯代谢物的含量,气相色谱法检测尿液中甲苯、甲醛及有机磷代谢物甲酸含量。结果:各方法检测限都与文献报道检测限相一致,且这些方法成功测定了85例人尿样中各相对应的污染物的含量。结论:本研究中采用的方法可用于监控和测定苯并芘、二恶英、多氯联苯、邻苯二甲酸二丁酯、有机磷、甲苯及甲醛对人体的危害。5、ELISA方法的初筛测定目的:验证ELISA方法作为样本初筛方法的可行性。方法:本研究使用ELISA试剂盒对可的宁、沙丁胺醇、氯丙嗪、已烯雌酚、黄曲霉素M1进行了测定。参照试剂盒检测步骤,对35例正常人尿样样本进行了检测。结果:各污染物在样本中都有被检出,且通过检测结果对比我们发现GC/MS能检测到的阳性样本在ELISA方法中都有检出。结论:用ELISA进行样本的初筛测定是可行的。综上所述:本研究对15种常见环境污染物的人体内暴露剂量检测方法进行了探索,提出了先ELISA初筛再色谱定量检测的方案。成功完成了对苯乙烯、尼古丁、雌激素类似物等污染物的GC/MS检测方法的分批合并,确定了其余7种污染物HPLC、顶空气相等精确定量检测方法及尼古丁、沙丁胺醇、己烯雌酚和氯丙嗪的ELISA初筛方法。并且本研究对大量样本进行了测定,其高检出率充分表明了环境污染物内暴露检测的必要性,也进一步验证了该系列方法方案是科学合理且可行的。本研究方法的建立可以在不降低检测准确度的情况下,能够有效降低检测工作量,并有效降低检测成本,为能快速、高效、低成本的大量检测样本,将检测技术推广到普通人群奠定了一定的基础。