肿瘤坏死因子是一种多功能的细胞因子，参与机体的免疫代谢调节，对某些癌细胞的生长具有抑制和细胞毒作用。肿瘤坏死因子还是一种感染性介导因子，在机体的炎症中起重要作用。由于TNF具有抗肿瘤作用和多种免疫调节功能，TNF疗法的临床研究已在许多国家开展。动物实验和临床实验均表明，TNF对某些肿瘤具有明显的抑制作用；但是由于副作用较大，为TNF的临床应用造成困难。建立合理的用药方案及治疗措施，可望降低用量，减轻副作用，达到最佳治疗效果。目前涉及肿瘤坏死因子的工作主要包括以下方面：一是通过遗传操作获得突变体，降低毒副作用；二是将肿瘤坏死因子与其它蛋白共同构建双功能的融合蛋白；三是用化学物质如二乙烯醚和马来酸酐、聚乙二醇（PEG）对肿瘤坏死因子进行修饰；四是在临床应用中将肿瘤坏死因子与其它细胞因子或加热疗法联合应用。 已知整合素αvβ3在肿瘤血管生成中具有重要的作用，我们根据文献报道，选用从噬菌体展示文库中筛选出的能与αvβ3特异性高效结合的含五个氨基酸的环肽CRGDC，利用基因工程方法将其融合在本室构建的新型 窜囚江医大学项士学位祖文高效低毒重组人肿瘤坏死因子（IrbTNF）的氨基末端，期望RGD－nIM能在肿瘤新生血管处富集，从而减少全身用药量，降低毒副反应，提高量效上匕。 本实验中，我们应用聚合酶链式反应技术对nlbTN－F氨基端的酶切位点进行改造，并人工合成了编码CRGDC的寡核旮酸片断，二者连接后，克隆入 PGEM3Zf质粒，序列分析表明，合成片断成功的插入 nIM氨基端。将融合基固克隆入 pBv上20表达载体中，在大肠杆菌中得到高效表达，表达量占菌体总蛋白的30％。在此基础上，又建立了利用硫酸锭沉淀、常压阴、阳离子交换色谱技术从大肠杆菌中分离提取表达产物的流程，成功纯化了RGD－nrhwi经SDS－PAGE鉴定结果：RGD－nrM融合蛋白的纯度达92％以上，蛋白回收率为257％。体外u29细胞杀伤实验证实比活性达到 5．7 XIO’，在昆明种，J、鼠体内接种腹水瘤细胞 SI 80，建立肿瘤模型，抑瘤实验表明：当 RGD－nrM的剂量为 12 X 10’lUll’g时，抑瘤率达到 84．9％，与对照组、相同剂量的nrbTN’F（肿瘤抑制率为59刀9％）组相比，有明显差异（P＜0．01）。且优于环磷酞胺组（肿瘤抑制率为71．ZI0）。