P-15多肽对体外培养人软骨细胞生物学特性的影响

来源 :川北医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yaqinghualei
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目的:通过观察不同浓度P-15多肽作用下人软骨细胞的生物学特性,探索不同浓度P-15多肽对体外培养的人软骨细胞的生物学特性的影响。方法:1、软骨细胞获取;标本取自川北医学院附属医院骨科因股骨颈骨折行全髋置换术的患者,取股骨头软骨组织,予胰蛋白酶、II型胶原酶联合消化法处理,获取软骨细胞后常规体外单层培养。倒置相差光镜观察软骨细胞,经过约15天培养后软骨细胞传至第3代,选取该代细胞进行后续实验。2、制备含P-15多肽培养液;将胎牛血清加入DMEM培养液中(使胎牛血清比为20%),加入P-15多肽,制备成0mg/L,100mg/L,200mg/L,400mg/L四种阶梯浓度含P-15多肽及胎牛血清的细胞培养液(A培养液);同理,将P-15加入DMEM培养液中,制备成0mg/L,100mg/L,200mg/L,400mg/L四种阶梯浓度含P-15多肽不含胎牛血清的细胞培养液(B培养液)。3、软骨细胞经A、B培养液培养后,予免疫组化、甲苯胺蓝染色鉴定软骨细胞细胞,ELISA技术测定细胞培养上清液中I、II型胶原蛋白含量,CCK-8试剂盒测定细胞活力,抗体芯片绝对定量检测FGF、BMP-2、PDGF-BB、IGFBP-3四个因子。结果采用SPSS统计软件分析。结果:(1)光学显微镜观察细胞形态:刚消化好未贴壁软骨细胞呈圆形,悬浮散在分布;细胞贴壁后逐渐变大,伸长,并呈多角状,第1至3代贴壁软骨细胞总体形态变化不大,增殖活性较强,培养细胞每增加一代,细胞贴壁所需时间缩短。(2)ELISA测定I、II型胶原蛋白含量结果:P-15多肽100mg/L、200mg/L组上清培养液中I型胶原蛋白含量低于空白组该蛋白含量,差异有统计学意义(P<0.05)。P-15多肽浓度为100mg/L时上清培养液中II型胶原蛋白含量(13.22±4.37pg/ml)高于其余各组,且与空白组及50mg/L组差异有统计学意义(P<0.05)。(3)CCK-8试剂盒测定细胞活力:OD值随细胞培养时间增加总体呈上升趋势,差异有统计学意义,其中第4-6天上升幅度最大;测得第6天不同浓度试验组间OD值差异有统计学意义(P<0.05),其中P-15为100mg/L时细胞增殖最强(1.12±0.03)。(4)因子定量检测:随培养细胞时间增加,细胞培养上清液中FGF、BMP-2、PDGF-BB、IGFBP-3四因子含量越高,实验组细胞培养上清液中FGF、PDGF-BB含量高于空白组,其中P-15为100mg/L时FGF、PDGF-BB含量最高。结论:1 P-15多肽可促进体外培养人软骨细胞增殖,其中P-15浓度为100mg/L时对本实验软骨细胞扩增作用可能最强。2 P-15多肽可延长体外培养人软骨细胞去分化现象出现时间,其中P-15浓度为100mg/L时作用效果可能最强。3 P-15多肽刺激体外培养人软骨细胞分泌FGF、PDGF-BB可能为P-15多肽对体外培养人软骨细胞作用机制之一。
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