目的:研究经尿道内镜下前列腺切除术后创面修复的过程;明确创面新生尿路上皮细胞的来源及前列腺上皮干细胞在再上皮化过程中的重要性。建立前列腺上皮干细胞向尿路上皮样细胞转分化的体外诱导模型。研究创面组织细胞中5型磷酸二酯酶（PDE5）蛋白表达量的动态变化;明确5型磷酸二酯酶抑制剂（PDE5i）在创面修复中的影响及相关机制。方法:1.利用腺相关病毒（AAV）对比格犬前列腺进行EGFP标记,随后建立前列腺切除动物模型;收集术后创面组织行HE染色、免疫荧光检测、流式细胞学分析、扫描电子显微镜检测,进而研究术后创面修复过程,明确再上皮化细胞来源;应用表达谱基因芯片和生物信息学分析尿素对前列腺上皮干细胞转录组的影响。2.应用磁珠细胞分选技术,分选高表达CD49f的前列腺上皮干细胞,建立前列腺上皮细胞-尿路上皮细胞转分化体外培养体系;利用免疫荧光、蛋白质免疫印迹（WB）检测细胞上皮细胞标志蛋白p63、CK5、CK8/18,前列腺上皮标志蛋白AR、PSA、Nkx3.1,尿路上皮标志蛋白Uroplakins等指标的变化;利用ELISA、跨膜电阻检测、增殖/凋亡实验研究细胞功能改变;应用RNA-seq和生物信息学分析细胞转录组学改变。3.应用免疫荧光、蛋白质免疫印迹、q PCR等技术检测BPH术后创面组织中PDE5表达;利用PDE5i分别处理前列腺上皮干细胞和前列腺基质成纤维细胞,通过体外转分化诱导,腺病毒感染,流式细胞学实验,结合免疫荧光、蛋白质免疫印迹等技术,研究干扰PDE5蛋白功能对前列腺上皮干细胞转分化,以及前列腺基质成纤维细胞纤维化、自噬和凋亡的影响;建立比格犬动物模型,收集术后创面组织,实验组动物口服长效PDE5i他达拉非,通过HE染色、免疫荧光染色、masson染色研究他达拉非对前列腺切除术后创面修复的作用。结果:1.成功对比格犬前列腺进行EGFP标记,并构建前列腺切除术动物模型;术后1-4周新生尿路上皮逐渐爬行覆盖,表达EGFP并形成细胞间紧密连接;术后创面附近前列腺上皮发生尿路上皮化生并向创面迁移,最终表达尿路上皮细胞标志蛋白;创伤导致尿液-组织屏障破坏,创面修复早期尿素可渗透入组织深处,尿素刺激使前列腺上皮干细胞转录组学发生明显改变。2.成功分选高表达CD49f的前列腺上皮干细胞,流式细胞学鉴定其高表达上皮干细胞标志蛋白p63、CD49f,低表达腔上皮细胞标志蛋白CD26;成功构建前列腺上皮-尿路上皮转分化培养基,前列腺上皮干细胞经过体外诱导培养后转分化为尿路上皮样细胞,高表达尿路上皮细胞标志蛋白Uroplakin,跨膜电阻＞3000Ω·cm~2,并且耐受高浓度尿素刺激;RNA-seq分析筛选出转分化前后差异基因5949个。3.免疫荧光染色发现PDE5蛋白在BPH术后1-3周新生尿路上皮细胞中高表达,在术后第4周逐渐降至正常水平;WB、q PCR证明M1型巨噬细胞能够促进前列腺上皮干细胞中PDE5表达;应用PDE5i能够促进前列腺上皮干细胞向尿路上皮细胞转分化;PDE5i还能抑制前列腺基质成纤维细胞纤维化、自噬,促进其凋亡;利用比格犬动物模型证明他达拉非促进术后创面修复。结论:1.前列腺部尿道创面再上皮化细胞来源于术后残存前列腺组织中的上皮干细胞;尿液中的尿素作用于前列腺上皮干细胞,抑制其向正常前列腺腔上皮细胞分化。2.利用前列腺-尿路上皮转分化培养系统能够将高表达CD49f的人前列腺上皮干细胞诱导成为尿路上皮样细胞。3.长效PDE5i他达拉非能够促进动物模型前列腺切除术后创面再上皮化,抑制创面过度纤维化,从而促进前列腺切除术后创面修复。