【摘 要】
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麻疯树(Jatropha curcas Linn)是大戟科(Euphorbiaceae)灌木树种,是一种多用途且有较高潜在价值的生物柴油树种。具有生长期短、耐旱、造林成本低及含油量高的特点。由于世界
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麻疯树(Jatropha curcas Linn)是大戟科(Euphorbiaceae)灌木树种,是一种多用途且有较高潜在价值的生物柴油树种。具有生长期短、耐旱、造林成本低及含油量高的特点。由于世界范围的能源紧张和生物质能的可再生性,麻疯树引起广泛关注。本研究采用cpSSR标记技术对来自云南和四川的10个麻疯树野生居群200个样本的遗传多样性进行分析,比较麻疯树居群间的遗传差异,以期为麻疯树的良种选育以及种质资源保护提供依据。研究结果如下：1.采用改良的CTAB法从麻疯树嫩叶中提取DNA。用该法提取的麻疯树DNA质量完全能满足cpSSR分析的要求。2.通过对影响cpSSR-PCR扩增的模板DNA、dNTP、引物、Taq DNA聚合酶以及Mg2+浓度等5因素(不同水平)的优化实验,建立了适合于麻疯树cpSSR-PCR扩增的体系：2.00mmol/L Mg2+、2U/μL Taq DNA聚合酶、0.2mmol/L dNTP、0.2μmol/L引物、35ng/μL DNA模板、用超纯水补足20μL；与之相适应的扩增程序为：95℃预变性5min；94℃变性30s,52℃退火30s,72℃延伸1min,循环36次；最后在72℃延伸5 min; 4℃保存。3.从25对cpSSR通用引物中筛选出12对引物,用于200个麻疯树样本的cpSSR分析。12对引物共检测到25个位点,其中22个位点是多态性位点,多态性位点百分率(P)为76.28%,说明这些居群适应环境的能力较强。研究结果表明,所检测的10个麻疯树野生居群具有较高的遗传多样性。其中,四川会理(SCHL)的遗传多样性最高,为0.6269；云南泸水(YNLS)遗传多样性最低,为0.4095。4. cpSSR基因座揭示了麻疯树的遗传变异：观测等位基因数A=1.9840,有效等位基因数Ae=1.7136; Nei基因多样性指数H=0.4020以及Shannon指数I=0.5767。另外,居群内的基因多样性为HS=0.4051,居群间的基因多样DST=0.0357。AMOVA分析得到居群内的遗传多样性为91.02%,居群间的遗传多样性为8.98%。这都说明遗传变异主要来自于居群内个体间。另外,居群间基因流Nm>1,为3.0585,说明居群间存在一定的基因流。5.基于cpSSR扩增条带数据建立了UPGMA聚类图。10个麻疯树野生居群的遗传一致度范围是0.8127-0.9798；遗传距离范围是0.0204-0.2073。其中四川雷波(SCLB)和云南西双版纳(XSBN)的遗传一致度最近(I=0.9798),遗传距离最小(D=0.0204)；而云南泸水(YNLS)和四川金河(SCJH)的遗传一致度最远(I=0.8127),遗传距离最大(D=0.1614)。另外,在UPGMA聚类图中四川金河(SCJH)和四川花棚子(SCHPZ)聚为一类；而四川会理(SCHL)、四川会东(SCHD)和四川雷波(SCLB)与云南的5个居群(YNSB、YNLX、YNPR、XSBN、YNLS)聚为另一类,这可能与四川地区的麻疯树居群是从云南引种过来的有一定关系。本研究获得的聚类结果表明,麻疯树10个野生居群并没有按照地理位置严格聚类,种源与地理来源的相关性不甚明显。
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