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目的:探讨CDC2581基因在人胰腺癌细胞株Patu8988中的表达情况,并将真核表达重组载体pcDNA-CDC2581转染至细胞中,观察CDC2581基因对细胞生物学行为的影响,以了解它在细胞周期及胰腺肿瘤细胞恶性转化方面的作用,为研究胰腺癌的发病机制与治疗提供理论依据。
方法:利用Lipofectamine2000将CDC2581转染至人胰腺癌细胞株Patu8988中,通过RT-PCR和Westernblot在mRNA和蛋白水平验证质粒转染成功,通过MTT实验、侵袭实验和细胞周期检测,观察CDC2581对细胞生物学行为的影响。
结果:RT-PCR发现在胰腺癌细胞株Patu8988和转染空质粒的细胞株中,CDC2581在mRNA水平表达很弱;转染pcDNA-CDC2581组中CDC2581高表达。Westernblot发现在胰腺癌细胞株Patu8988中,CDC25B蛋白有少量表达;转染pcDNA-CDC2581组CDC25B蛋白高表达。MTT实验显示,转染pcDNA-CDC2581组的细胞生长在72h受到明显抑制(P<0.05)。侵袭实验显示,转染pcDNA-CDC2581的细胞其穿透Matrigel胶的能力明显增强(P<0.05)。流式细胞计量术显示,转染了pcDNA-CDC2581组中,G1期的细胞明显增多(P<0.05);同时转染了pcDNA-CDC2581组中,G2期的细胞明显减少,与未处理组比较有统计学意义(P<0.05)。
结论:在胰腺癌细胞株Patu8988中的CDC2581转录水平很弱,存在少量CDC25B蛋白表达。转染的CDC2581基因提高CDC2581蛋白的表达,使细胞停滞在G1期,对细胞的生长有抑制作用,但能够增强细胞的侵袭能力;CDC2581可能不是通过单一的调控细胞周期而实现其对细胞的影响,还存在其它多种途径。