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睾丸特异性蛋白酶50（Testes-specific protease50, TSP50）在多种肿瘤组织中存在异常高表达，并在肿瘤的发生及发展过程中发挥重要作用，因此TSP50是潜在的抗肿瘤药物筛选与治疗的靶点。在本研究中，我们为找出能显著抑制TSP50表达的化合物，构建了TSP50启动子驱动的荧光素酶报告载体，将其转入HEK293T细胞后对300多种中药单体化合物进行了筛选。通过对化合物抑制TSP50基因启动子活性的分析，筛选出了两个能有效抑制TSP50基因启动子活性的化合物，即土木香内酯和小豆蔻明。土木香内酯和小豆蔻明均能下调TSP50基因的mRNA和蛋白表达。另外我们发现这两个化合物均能增加TSP50高表达的肿瘤细胞内Bax/Bcl-2的比率，激活caspase-9和caspase-3。另外，小豆蔻明还能诱导TSP50高表达的肿瘤细胞发生G2/M期阻滞，下调周期相关蛋白cyclin E的表达，同时上调CDK2和p21的表达。而通过RNA干涉方法抑制肿瘤细胞内源性TSP50表达可明显抑制肿瘤细胞的活力，其效果与两个化合物基本相同。进一步实验结果显示，在肿瘤细胞中过表达TSP50后，土木香内酯和小豆蔻明抑制肿瘤细胞增殖的能力均明显下降。综上所述，在内源性表达TSP50的肿瘤细胞中，土木香内酯和小豆蔻明可诱导线粒体依赖的细胞凋亡，而且小豆蔻明诱导的G2/M期阻滞至少部分是通过下调TSP50的表达来实现的。本研究为进一步开发以TSP50为靶点的抗肿瘤药物奠定了物质基础。