酿酒酵母S.cerevisiae CWY132生物转化产2-苯乙醇的研究

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2-苯乙醇是一种具有玫瑰花香的芳香醇,广泛应用于医药、化妆品、食品、烟草和日化用品行业。利用酵母生物转化生产天然2-苯乙醇具有广阔的市场前景和应用价值。本文以一株高产2-苯乙醇的突变菌株S.cerevisiae CWY132为研究对象,从分子生物学的角度对酵母生物转化产2-苯乙醇的代谢途径——艾利希途径进行了深入的研究。克隆并表达了该途径中3个关键基因ARO8、ARO9和ARO10。通过序列分析,与原菌株S.cerevisiae AS 2.516比对,发现突变菌株S.cerevisiae CWY132的ARO9和ARO10基因分别有两个碱基发生突变,导致相应的两个氨基酸残基发生改变。我们认为这两个突变的基因与菌株产2-苯乙醇能力的提高存在重要的联系。本文进一步对S.cerevisiae CWY132生物转化产2-苯乙醇的最适培养条件进行了研究。在优化后的培养条件下2-苯乙醇的产量达到3.98 g/L,比初始条件的1.9 g/L提高了109 %。原料L-苯丙氨酸的摩尔转化率从最初的51.4 %提高到了92.7 %。这一产量水平已达到或略微超过国外报道的单相分批培养条件下的最高产量3.8 g/L。在优化后的培养条件的基础上,将摇瓶培养体系放大到台式发酵罐,对S.cerevisiae CWY132小试生产2-苯乙醇的培养工艺进行了初步的研究。使发酵液中的2-苯乙醇浓度进一步提高到了4.1 g/L。由于培养体系中的2-苯乙醇对酵母细胞有严重的抑制作用,使得2-苯乙醇的产量进一步提高受到严重的限制。原位产物分离技术是解决这一难题的有效途径。我们对S.cerevisiae CWY132以糖蜜为碳源,生物转化生产2-苯乙醇的液液两相培养体系进行了初步的探索。结合分批补料培养工艺,使摇瓶体系中2-苯乙醇的产量达到了9.03 g/L,有效解除了2-苯乙醇对菌体的毒性作用。
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