芯片PCR产物在线/实时毛细管芯片电泳分离及激光诱导荧光检测

来源 :东北大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:caonimadoucunzai
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直接对PCR产物进行实时在线定性、定量分析在DNA分析中具有很强的实用意义,也是微流控芯片分析技术中具有很大挑战性的研究课题。本论文基于自建的激光诱导荧光检测平台,在静态芯片PCR技术的基础上,借助狭缝进样,实现了芯片PCR和毛细管芯片电泳的在线连接,实现了对扩增产物的在线取样、分离和检测,还在此芯片系统上初步展示了对DNA扩增产物进行实时取样和分离检测的能力。第一章对PCR反应原理及PCR分类的发展情况进行回顾,重点对实时荧光定量PCR进行了介绍;其次对集成毛细管电泳芯片技术中的基材、进样方式及不同检测方法等情况进行了综述。第二章以倒置显微镜为平台建立了基于半导体激光器(487/532nm)的共聚焦激光诱导荧光(LIF)检测系统,并对其性能进行了表征,罗丹明B的最低检出浓度为1×10-12mol/L.第三章建立了基于狭缝进样的石英毛细管芯片电泳系统,以荧光探针分子对其重现性、分离度等参数进行了表征。基于狭缝进样的峰高重现性为0.95%(n=9),分离效率达2.66×105塔板数/m。该芯片具有制备方法简单,操作方便,分离效率高和易于自动化等特点。第四章基于狭缝进样的芯片毛细管电泳成功地用于DNA Marker.?DNA及血浆中DYZ-1型性别基因扩增产物等样品的高效率(2.91×105塔板数/m)、高重现性的分离和检测。该芯片电泳系统与静态芯片PCR在线连接,实现了血浆中DYZ-1型性别基因产物的在线取样、分离和检测,初步展示了在PCR扩增过程中对扩增产物的实时取样分离和检测。本文建立的芯片毛细管电泳PCR产物实时在线取样和分离检测的方法有可能成为新型定量PCR分析系统的基础。
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