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目的:研究重庆地区儿童侵袭性感染分离的肺炎链球菌和正常儿童鼻咽部携带的肺炎链球菌的多位点序列分型、血清型别和耐药性的差异,以及侵袭性菌株重要毒力因子碱基序列的保守情况。为临床肺炎链球菌疾病的预防和治疗以及蛋白疫苗的研发应用提供参考。 方法:收集2010年至2013年重庆医科大学附属儿童医院11岁以下儿童侵袭性感染分离出的51株肺炎链球菌。同时在重庆市渝中区社区医院和幼儿园收集6岁以下无呼吸道疾病的健康儿童的咽拭子标本,从中分离得到14株肺炎链球菌。采用PCR扩增这65株肺炎链球菌的7个管家基因:莽草酸脱氢酶(aroE)、6-磷酸葡萄糖脱氢酶(gdh)、葡萄糖激酶(gki)、转酮醇酶(recP)、信号肽酶I(spi)、黄嘌呤磷酸核糖基转移酶(xpt)、D-丙氨酸-D-丙氨酸连接酶(ddl),测序后在MLST数据库中查询得到每株菌株的序列型(ST)。并采用多重PCR的方法对它们进行血清型分型。同时PCR扩增51株侵袭性肺炎链球菌的11个毒力基因:溶血素(ply)、自溶素A(lytA)、神经氨酸酶A(nanA)、组氨酸三聚体蛋白(phtD)、酪蛋白水解蛋白酶P(clpP)、荚膜(cps2A)、细菌素(bacteriocin)、表面粘附素A(psaA)、获铁蛋白A(piaA)、B组链球菌细胞壁分离蛋白(pcsB)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(stkP),测序后分析碱基序列的突变情况。采用MIC法测定青霉素、左旋氧氟沙星、红霉素等15种抗生素对65株肺炎链球菌的最低抑菌浓度(MIC)。 结果在65株肺炎链球菌中一共检出了19种ST。其中,ST876、ST81和ST3173在侵袭性菌株和正常携带菌株中均有检出。 ST320、ST2296、ST242、ST90、ST99、ST2754、ST902、ST271、ST4112和ST3263仅出现在侵袭性菌株中,而ST983、ST2912、ST7759、ST3397、ST7752和ST7392仅出现在携带菌株中。同时,在这65株肺炎链球菌中一共检出了11种血清型。其中,血清型14、6A/6B、23F、19F在两类菌株中均有检出。19A、1、33/33B、11/11A、17F仅在侵袭性菌株中检出,而血清型15和6C只出现在携带菌株中。本次研究中的侵袭性菌株和携带菌株对万古霉素、利奈唑胺、左旋氧氟沙星和莫西沙星全部敏感,携带菌株同时还对头孢噻肟和泰利霉素也全部敏感。侵袭性菌株对红霉素(P=0.001)、青霉素(P=0.001)、美洛配能(P=0.018)、头孢噻肟(P=0.007)和克林霉素(P=0.034)的不敏感率明显高于携带菌株,而携带菌株的对氯霉素(P=0.005)和四环素(P>0.05)的不敏感率却高于侵袭性菌株。其他4种抗生素的不敏感率均是侵袭性菌株高于携带菌株,但无统计学意义(P>0.05)。侵袭性菌株毒力基因:ply、lytA、nanA、phtD、clpP、cps2A、bacteriocin、psaA、piaA、pcsB和stkP的碱基序列保守性分别为97.82%、96.31%、82.96%、87.50%、98.48%、83.68%、66.27%、99.46%、98.63%、88.72%和96.67%。 结论:19A在重庆地区儿童侵袭性肺炎链球菌血清型分布中所占比例最高,因此本地区儿童在接种肺炎链球菌疫苗时,应首选含有19A血清型荚膜多糖抗体的PCV13。本次研究中的毒力因子ply、stkP、piaA、lytA、clpP和psaA在临床菌株中保守性较高,具有作为肺炎链球菌疫苗候选蛋白的潜力。新一代大环内酯类药物泰利霉素可作为本地区儿童首选的抗IPD药物。而本地区儿童侵袭性肺炎链球菌菌株和携带菌株在遗传多态性、血清型分布和耐药性上均存在一定差异,为肺炎链球菌的流行病学研究和临床经验性用药提供了参考。